ძირითადი განსხვავება – SDS გვერდი და Western Blot
Western blotting არის ტექნიკა, რომელიც განსაზღვრავს სპეციფიკურ პროტეინს ცილის ნიმუშიდან. ეს ტექნიკა შესრულებულია რამდენიმე ძირითადი ნაბიჯით: გელის ელექტროფორეზი, ბლოტი და ჰიბრიდიზაცია. ნატრიუმის დოდეცილ სულფატის პოლიაკრილამიდის გელის ელექტროფორეზი (SDS Page) არის გელის ელექტროფორეზის ერთგვარი ტექნიკა, რომელიც გამოიყენება ცილების განცალკევებისთვის მათი ზომის (მოლეკულური წონის) მიხედვით. Western blot არის ბლოტი მემბრანის სპეციალური ფურცელი, რომელიც გამოიყენება SDS გვერდზე ცილების იგივე ნიმუშის გადასატანად. SDS გვერდისა და western blot-ს შორის მთავარი განსხვავებაა ის, რომ SDS გვერდი საშუალებას აძლევს ცილების განცალკევებას ნარევში, ხოლო western blot საშუალებას იძლევა კონკრეტული ცილის აღმოჩენა და რაოდენობრივი განსაზღვრა ნარევიდან.ორივე სასარგებლოა ცილის ანალიზის კვლევებში.
რა არის SDS გვერდი?
SDS გვერდი არის გელის ელექტროფორეზის ტექნიკა, რომელიც გამოიყენება ცილების გამოყოფისთვის. იგი ჩვეულებრივ გამოიყენება ბიოქიმიაში, გენეტიკაში, სასამართლო და მოლეკულურ ბიოლოგიაში. მას შემდეგ, რაც პროტეინები გამოიყოფა ნიმუშიდან, ისინი გაშვებულია გელზე, რომელიც შედგება SDS და პოლიაკრილამიდისგან. SDS არის ანიონური სარეცხი საშუალება, რომელიც გამოიყენება ცილების (ცილების დენატურაციის) წრფივირებისთვის და მათი მოლეკულური მასის პროპორციული ხაზოვანი პროტეინებისთვის უარყოფითი მუხტის გადასაცემად. პოლიაკრილამიდი ხდება გელის მყარი საყრდენი. დენატურირებული ცილები, რომლებიც უარყოფითად დამუხტულია, გელის მეშვეობით მიგრირებენ აპარატის დადებითი ბოლოებისკენ. ცილების ზომის მიხედვით, მიგრაციის სიჩქარე განსხვავდება ცილებს შორის და ხდება გამოყოფა. ამიტომ, SDS გვერდი სასარგებლოა ცალკეული ცილების გამოყოფისთვის მათი ზომის მიხედვით.
პოლიაკრილამიდის გელის მომზადება ცილების ფრაქციებისთვის გადამწყვეტი ნაბიჯია SDS გვერდზე.პოლიაკრილამიდის სწორი კონცენტრაცია და გამოყენებული ჯვარედინი დამაკავშირებელი აგენტის ტიპი ძლიერ გავლენას ახდენს გელის ფიზიკურ თვისებებზე, რაც განაპირობებს სხვადასხვა ცილების რეალურ გამოყოფას. გელის ფორების ზომები სათანადოდ უნდა იყოს მართვადი ეფექტური განცალკევებისთვის. თუმცა, SDS გვერდი განიხილება, როგორც მაღალი გარჩევადობის ცილების გამოყოფის ტექნიკა.
SDS Page ტექნიკას აქვს ძირითადი შეზღუდვა ცილების ანალიზში. ვინაიდან SDS ახდენს ცილების დენატურაციას გამოყოფამდე, ის არ იძლევა ფერმენტული აქტივობის, ცილებთან შეკავშირების ურთიერთქმედების, ცილოვანი კოფაქტორების და ა.შ. გამოვლენის საშუალებას.
სურათი 01: SDS გვერდი
რა არის Western Blot?
Western blotting ტექნიკა საშუალებას გაძლევთ ამოიცნოთ კონკრეტული პროტეინი ცილოვანი ნარევიდან და გაზომოთ ცილის რაოდენობა და მოლეკულური წონა. Western blot არის მემბრანა, რომელიც გამოიყენება ბლოტირების პროცედურის დროს SDS-პოლიაკრილამიდის გელში ცილის შაბლონების სარკისებური გამოსახულების მისაღებად. მემბრანა, რომელიც გამოიყენება ვესტერნ ბლოტინგისთვის, ძირითადად შედგება ნიტროცელულოზის ან პოლივინილიდენ დიფტორიდისგან (PVDF). მემბრანა გადატანილი ცილით შეიძლება გამოყენებულ იქნას სასურველი ცილის იდენტიფიცირებისთვის. მას სჭირდება მაღალი ხარისხის ანტისხეულები სასურველი ცილის ჰიბრიდიზაციის გზით გამოსავლენად. ანტისხეული აკავშირებს მის სპეციფიკურ ანტიგენს და ავლენს სასურველი ანტიგენის არსებობას, რომელიც არის ცილა.
პროტეინების გადატანა SDS პოლიაკრილამიდის გელიდან ვესტერნ ბლოტში ხდება ელექტრობლოტირების გზით. ეს არის ეფექტური და სწრაფი მეთოდი, რომელიც იწვევს ცილების ელექტროფორეზირებას გელიდან და გადადის ნიტროცელულოზის მემბრანაზე (ვესტერნ ბლოტი).
სურათი 02: Western Blot
რა განსხვავებაა SDS გვერდსა და Western Blot-ს შორის?
SDS გვერდი წინააღმდეგ Western Blot |
|
| SDS გვერდი არის გელის ელექტროფორეზის ტექნიკა. | Western blot არის ტექნიკა, რომელიც კეთდება მემბრანაზე ნარევიდან კონკრეტული ცილის გამოსავლენად. |
| გამოიყენე | |
| SDS გვერდი საშუალებას იძლევა ცილების გამოყოფა მათი ზომის მიხედვით. | Western blot იძლევა ცილების გადატანას SDS გვერდის გელზე მისი ნიმუშის შეცვლის გარეშე და საშუალებას აძლევს ჰიბრიდიზაციას სპეციფიკურ ანტისხეულებთან. |
| ნაკლოვანებები | |
| პროტეინის დენატურაცია, მაღალი ღირებულება და ნეიროტოქსინის ქიმიკატების არსებობა ამ ტექნიკის უარყოფითი მხარეა. | ეს ტექნიკა შრომატევადია და მოითხოვს კარგ გამოცდილ პირად და სპეციფიკურ კონტროლირებულ პირობებს. |
რეზიუმე – SDS გვერდი წინააღმდეგ Western Blot
SDS გვერდი და western blot არის ორი მეთოდი, რომელიც ჩართულია ცილების ანალიზში. SDS გვერდი იძლევა გელზე ცილების მარტივად გამოყოფას მათი მოლეკულური წონის მიხედვით. Western blot ეხმარება დაადასტუროს კონკრეტული ცილის არსებობა და რაოდენობა სპეციფიურ ანტისხეულებთან ჰიბრიდიზაციის გზით. ეს არის განსხვავება SDS გვერდსა და western blot-ს შორის.
