საკვანძო განსხვავება უჯრედების მთლიან რაოდენობასა და სიცოცხლისუნარიან უჯრედების რაოდენობას შორის არის ის, რომ მთლიანი უჯრედების რაოდენობა აფასებს ყველა უჯრედს, მათ შორის როგორც ცოცხალი, ასევე მკვდარი მიკრობული უჯრედების ნიმუშში, ხოლო სიცოცხლისუნარიანი უჯრედების რაოდენობა აფასებს მხოლოდ ცოცხალ მიკრობული უჯრედებს ნიმუშში.
პოპულაციაში ორგანიზმების რაოდენობის დათვლა საჭიროდ ითვლება ექსპერიმენტული სამუშაოების უმეტესობისთვის. ამიტომ, ჩვენ ვცდილობთ გავაანალიზოთ ნიმუშში მიკრობების რაოდენობა პირდაპირი და არაპირდაპირი მეთოდების გამოყენებით. პირდაპირი გაზომვები მოიცავს მეთოდებს, რომლებიც პირდაპირ ითვლიან უჯრედების რიცხვს. არაპირდაპირი გაზომვები მოიცავს ზოგიერთი პარამეტრის გაზომვას, რომელიც შეიძლება დაკავშირებული იყოს უჯრედების რაოდენობასთან, როგორიცაა უჯრედის სიმკვრივე, მშრალი წონა და ა.შ.ზოგიერთი მეთოდი ადგენს ნიმუშში მხოლოდ ცოცხალი მიკრობული უჯრედების რაოდენობას. სიცოცხლისუნარიანი უჯრედების რაოდენობა ერთ-ერთი ასეთი მეთოდია. პირდაპირი მიკროსკოპული დათვლა რაოდენობრივად ადგენს ყველა უჯრედს საშუალო/ნიმუშის ცნობილ მოცულობაში მიკროსკოპის გამოყენებით. ამიტომ ის ითვლის როგორც ცოცხალ, ისე მკვდარ უჯრედებს. ეს არის უჯრედების მთლიანი რაოდენობის ტიპი.
რა არის უჯრედების მთლიანი რაოდენობა?
უჯრედების ჯამური დათვლა არის მეთოდი, რომელიც გულისხმობს ყველა უჯრედის დათვლას საშუალების/ნიმუშის ცნობილ მოცულობაში მიკროსკოპისა და დამთვლელი კამერის (ჰემოციტომეტრის) გამოყენებით. სიცოცხლისუნარიანი რიცხვებისგან განსხვავებით, ითვლიან როგორც ცოცხალი, ასევე მკვდარი უჯრედები. აქედან გამომდინარე, ეს არის მთლიანი რაოდენობა, თუ დაკვირვების დროს არ იქნა გამოყენებული სიცოცხლისუნარიანობის ლაქა. მიკროსკოპის დროს უჯრედებს აკვირდებიან უშუალოდ მიკროსკოპის ქვეშ და ითვლიან. იგი იყენებს უჯრედის სუსპენზიას, რომელიც შედგება მიკრობული უჯრედებისგან. დათვლისა და ზუსტი გაზომვის სიმარტივისთვის, ნიმუშის განზავება შეიძლება გაკეთდეს. უჯრედების ძალიან მაღალ/დაბალ კონცენტრაციებში მიკროსკოპის გამოყენებით უჯრედების მთლიანი რაოდენობის მიღება რთული ამოცანაა.
სურათი 01: დათვლის კამერა - ჰემოციტომეტრი
სამთვლელი კამერები მარტივი, იაფი და სწრაფია უჯრედების მთლიანი რაოდენობის აღებისას. რაც მთავარია, დათვლის კამერები სასარგებლოა როგორც ევკარიოტების, ასევე პროკარიოტების დასათვლელად. ჩვენ ვითვლით უჯრედებს ცნობილი მოცულობის არჩეულ კვადრატებში უჯრედების მთლიანი რაოდენობის დასადგენად.
რა არის სიცოცხლისუნარიანი უჯრედების რაოდენობა?
სიცოცხლისუნარიანი უჯრედების რაოდენობა არის ნიმუში ცოცხალი მიკრობული უჯრედების დათვლის მეთოდი. ის ითვლის მხოლოდ ცოცხალ უჯრედებს ნიმუშში. სიცოცხლისუნარიანი ფირფიტების რაოდენობა, მემბრანული ფილტრაცია და ყველაზე სავარაუდო რიცხვი სიცოცხლისუნარიანი უჯრედების დათვლის რამდენიმე ტექნიკაა. ეს მიდგომები ეფუძნება ზრდას. სიცოცხლისუნარიანი ფირფიტების დათვლის მეთოდი არის მძლავრი მეთოდი, რომელიც გამოიყენება მრავალ მიკრობიოლოგიურ სფეროში, მათ შორის საკვებისა და რძის პროდუქტების მიკრობიოლოგიაში, სამედიცინო მიკრობიოლოგიაში, გარემოს მიკრობიოლოგიაში, მიკრობული გენეტიკაში, ზრდის მედიის განვითარებასა და ბიოტექნოლოგიაში.
სიცოცხლისუნარიანი ბაქტერიების დათვლის ყველაზე გავრცელებული გზაა ნიმუშის გამოყენება, რომელსაც შეუძლია შექმნას კოლონიები აგარის გარემოზე. არსებობს ორი ძირითადი გზა თეფშების დათვლის შესასრულებლად: თეფშების გავრცელების ტექნიკა და დაასხით ფირფიტის ტექნიკა. ნიმუშის ცნობილი მოცულობა შეიძლება ან გავრცელდეს აგარის ფირფიტის ზედაპირზე, ან შერეული იყოს აგარში. შემდეგ ფირფიტა ინკუბირებულია და წარმოქმნილი კოლონიების დათვლა ხდება. კოლონიების რაოდენობა დაკავშირებულია ორიგინალური ნიმუშის მიკროორგანიზმების რაოდენობასთან. სიცოცხლისუნარიანი რაოდენობა ზომავს მხოლოდ იმ უჯრედებს, რომლებიც ცოცხლობენ და იზრდებიან.
სურათი 02: სიცოცხლისუნარიანი ფირფიტების რაოდენობა
ყველაზე სავარაუდო რიცხვი (MPN) არის ფირფიტების დათვლის მეთოდების ალტერნატივა სიცოცხლისუნარიანი უჯრედების პოპულაციის სიმკვრივის შესაფასებლად. ის ითვლის თხევად კულტურაში მზარდ ორგანიზმებს და, შესაბამისად, უპირატესად ბაქტერიოლოგიურ ტექნიკას წარმოადგენს.ის განსაკუთრებით სასარგებლოა ორგანიზმების დაბალი კონცენტრაციისთვის მაგ. რძე, სასმელი წყალი.
მემბრანული ფილტრაციის ტექნიკა უფრო შესაფერისია, როდესაც მიკრობები ძალიან განზავებულია, როგორც ქალაქის წყალმომარაგებაში. ეს კეთდება უბრალოდ სითხის ცნობილი მოცულობის ფილტრის გავლით და მკვებავ გარემოზე ინკუბაციით. ფილტრზე განვითარებული კოლონიები ითვლიან და გამოითვლება ბაქტერიების რაოდენობა ნიმუშზე თითო მილილიტრზე.
რა მსგავსებაა უჯრედების მთლიან რაოდენობასა და სიცოცხლისუნარიან უჯრედების რაოდენობას შორის?
- უჯრედების მთლიანი რაოდენობა და სიცოცხლისუნარიანი უჯრედების რაოდენობა არის მიკრობული ტექნიკის ორი ტიპი, რომლებიც განსაზღვრავს უჯრედებს.
- ისინი ჩვეულებრივ გამოიყენება აღრიცხვის ტექნიკას მიკრობიოლოგიურ ლაბორატორიებში.
რა განსხვავებაა უჯრედების მთლიან რაოდენობასა და სიცოცხლისუნარიან უჯრედების რაოდენობას შორის?
უჯრედების მთლიანი რაოდენობა აღრიცხავს ყველა ცოცხალ და მკვდარ მიკრობულ უჯრედს ნიმუშში. ამის საპირისპიროდ, სიცოცხლისუნარიანი უჯრედების რაოდენობა ითვლის ნიმუშში მხოლოდ ცოცხალ უჯრედებს.ასე რომ, ეს არის მთავარი განსხვავება უჯრედების მთლიან რაოდენობასა და სიცოცხლისუნარიან უჯრედების რაოდენობას შორის. უჯრედების მთლიანი რაოდენობა დამოუკიდებელია კოლონიების ზრდისგან აგარის ფირფიტებზე, ხოლო სიცოცხლისუნარიანი უჯრედების რაოდენობა ზრდაზე დაფუძნებული ტექნიკაა და ეს დამოკიდებულია მიკრობული კოლონიების ზრდაზე აგარის ფირფიტებზე.
ქვემოთ მოცემული ინფოგრაფიკა აჯამებს განსხვავებას უჯრედების მთლიან რაოდენობასა და სიცოცხლისუნარიან უჯრედების რაოდენობას შორის.
რეზიუმე – უჯრედების ჯამური რაოდენობა vs სიცოცხლისუნარიანი უჯრედების რაოდენობა
უჯრედების მთლიანი რაოდენობა აღრიცხავს როგორც ცოცხალ, ისე მკვდარ მიკრობულ უჯრედებს, ხოლო სიცოცხლისუნარიანი უჯრედების რაოდენობა მხოლოდ ცოცხალ უჯრედებს. ამრიგად, ეს არის მთავარი განსხვავება უჯრედების მთლიან რაოდენობასა და სიცოცხლისუნარიან უჯრედების რაოდენობას შორის. ასევე, სიცოცხლისუნარიანი უჯრედების რაოდენობა არის ზრდაზე დაფუძნებული ტექნიკა, უჯრედების მთლიანი დათვლისგან განსხვავებით.უფრო მეტიც, ის მოითხოვს ფირფიტების ინკუბაციას ხილული კოლონიების მიღებამდე. სიცოცხლისუნარიანი ფირფიტების რაოდენობა, MPN და მემბრანული ფილტრაცია სიცოცხლისუნარიანი უჯრედების დათვლის რამდენიმე ტექნიკაა, ხოლო პირდაპირი მიკროსკოპია და ჰემოციტომეტრის გამოყენება უჯრედების საერთო რაოდენობის ორი ტექნიკაა.
