ძირითადი განსხვავება – T4 vs T7 დნმ ლიგაზა
დნმ ლიგაზა არის მნიშვნელოვანი ფერმენტი, რომელიც გამოიყენება მოლეკულური ბიოლოგიის ტექნიკაში. ის ფუნქციონირებს როგორც მოლეკულური წებო ნუკლეოტიდების შესაერთებლად ნუკლეოტიდებს შორის ფოსფოდიესტერული ბმების წარმოქმნით. ფოსფოდიესტერული ბმები წარმოიქმნება შაქრის ნაწილის 3' ჰიდროქსილის ბოლოსა და 5' ბოლო ფოსფატის ჯგუფს შორის. დნმ ლიგაზა სასიცოცხლოდ მნიშვნელოვანია რეპლიკაციის პროცესში, რათა შეუერთდეს ჩამორჩენილი ჯაჭვის ოკაზაკის ფრაგმენტებს და დნმ-ის აღდგენის მექანიზმებისა და ინ ვიტრო კლონირების ექსპერიმენტების დროს, რათა შეუერთდეს სასურველი გენი ვექტორის გენომს. ამჟამად მოლეკულური ბიოლოგების მიერ გამოიყენება ორი ძირითადი დნმ ლიგაზა: T4 და T7 დნმ ლიგაზა. T4 დნმ ლიგაზა არის ერთ-ერთი პირველი ფერმენტი, რომელიც იზოლირებულია T4 ბაქტერიოფაგისგან. T7 დნმ ლიგაზა, რომელიც უფრო მცირე ცილაა, არის T7 ბაქტერიოფაგისგან გამოყოფილი ფერმენტი. ეს არის მთავარი განსხვავება T4 და T7 დნმ ლიგაზებს შორის.
რა არის დნმ ლიგაზას მოქმედება?
დნმ-ის ლიგირება ხდება სამსაფეხურიან რეაქციაში. პირველი ნაბიჯი არის ნუკლეოფილური შეტევა ATP-ის ალფა-ფოსფორზე, რომელიც წარმოქმნის კოვალენტურ ფერმენტ-ადენილატის შუალედს, რომელშიც AMP დაკავშირებულია ლიზინის ტერმინალური გვერდითი ჯაჭვის აზოტთან. მეორე საფეხურზე ხდება ნუკლეოფილური შეტევა ფერმენტ-ადენილატის ფოსფორზე 5'-ფოსფატით დასრულებული დნმ-ის სუბსტრატით, ათავისუფლებს ლიზინს და წარმოქმნის დნმ-ადენილატს. საბოლოო საფეხურზე დნმ-ადენილატს ესხმის დნმ-ის სხვა ჯაჭვის 3'- OH, ათავისუფლებს AMP და უერთდება პოლინუკლეოტიდებს.
რა არის T4 დნმ ლიგაზა?
T4 ლიგაზა იყო პირველი ლიგაზა, რომელიც იზოლირებული და იდენტიფიცირებული იყო მესელსონის, ვეიგლისა და კელენბერგერის მიერ და იყო პირველი კომერციული ლიგაზა წარმოებული. T4 დნმ ლიგაზა არის ATP დამოკიდებული ფერმენტი, რომელიც კატალიზებს ფოსფოდიესტერული ბმის ფორმირებას. ეს არის ერთი პოლიპეპტიდური ჯაჭვი 487 ამინომჟავის ნარჩენებით და აქვს მოლეკულური წონა დაახლოებით 77 kDa. მისი აქტივობის ოპტიმალური pH 7,5 – 8 დიაპაზონშია..
სურათი 01: T4 დნმ ლიგაზა
T4 დნმ ლიგაზა, როგორც მისი სახელი გვთავაზობს, იმყოფება ბაქტერიოფაგ T4-ში და იზოლირებულია, როდესაც ფაგმა გამოიმუშავა ფერმენტი E. coli-ით ინფექციისას. ფერმენტი აკავშირებს ორჯაჭვიან დნმ-ის დუპლექსებს ბლაგვი ბოლოებით და შესაკრავი ფრაგმენტები ერთმანეთთან ახლოს უნდა იყოს.
რა არის T7 დნმ ლიგაზა?
T7 ლიგაზა არის 41 kDa ცილა, რომელიც წარმოიქმნება T7 ბაქტერიოფაგის მიერ და იზოლირებულია E. coli უჯრედების ინფიცირებით. T7 ლიგაზას მთავარი ფუნქციაა დნმ-ის დუპლექსების ლიგატი ფოსფოდიესტერული კავშირებით და კლონირების ექსპერიმენტების დროს დნმ-ის მიმდებარე ფრაგმენტების შეერთება. T7 დნმ ლიგაზას ოპტიმალური pH 7.0 – 7.2 დიაპაზონშია. T7 ლიგაზა არის ATP დამოკიდებული. T7 დნმ ლიგაზებს ასევე შეუძლიათ დნმ-ისა და რნმ-ის ჰიბრიდების ანეილირება, რაც იწვევს ტრანსკრიფციის დროს არანორმალურ კონფორმაციებს; თუმცა, ეს ფენომენი ჯერ კიდევ კვლევის პროცესშია in vitro კვლევებით.
რა მსგავსებაა T4 და T7 დნმ ლიგაზას შორის?
- T4 და T7 დნმ ლიგაზა მონაწილეობენ ლიგაციის რეაქციაში დნმ-ის დუპლექსების ანელებით ფოსფოდიესტერული ბმის წარმოქმნით დნმ-ის ფრაგმენტის 3'OH ბოლოსა და 5' ფოსფატის ბოლოებს შორის.
- ორივე ფერმენტი აკავშირებს ბლაგვი ბოლოიანი დნმ-ის დუპლექსებს, რომლებიც ახლოს არიან ერთმანეთთან.
- ორივე ფერმენტი არის ATP დამოკიდებული.
- ეს ფერმენტები იზოლირებულია E. coli უჯრედების კონკრეტული ბაქტერიოფაგით ინფიცირებით.
- ორივე ფერმენტის გამოყენება მოიცავს:
- მოლეკულური კლონირება - საინტერესო გენის ვექტორთან დასაკავშირებლად
- დნმ-ის შეკეთება – ორჯაჭვიანი ნიშების შესაკეთებლად
- ინ ვიტრო დნმ-ის რეპლიკაცია
- ლიგაზას ჯაჭვური რეაქცია
რა განსხვავებაა T4 და T7 დნმ ლიგაზას შორის?
T4 vs T7 დნმ ლიგაზა |
|
| T4 დნმ ლიგაზას ტიპი დნმ ლიგაზა, რომელიც იზოლირებულია ბაქტერიოფაგ T4-დან და მონაწილეობს მიმდებარე დნმ-ის ფრაგმენტების ლიგირებაში ფოსფოდიესტერული ბმის ფორმირების გზით. | T7 დნმ ლიგაზას ტიპი დნმ ლიგაზა, იზოლირებულია ბაქტერიოფაგ T7-დან და მონაწილეობს მიმდებარე დნმ-ის ფრაგმენტების ლიგირებაში ფოსფოდიესტერული ბმის ფორმირების გზით. |
| ცილის ზომა | |
| T4 დნმ ლიგაზას ზომა არის 77 kDa - უფრო დიდი T7 დნმ ლიგაზასთან შედარებით. | T7 დნმ ლიგაზას ზომაა 41 კდა. |
| ოპტიმალური pH | |
| pH დიაპაზონი, რომელიც მუშაობს T4 დნმ ლიგაზაზე, არის 7,5 – 8,0. | pH დიაპაზონი, რომელიც მუშაობს T7 დნმ ლიგაზაზე, არის 7.0 – 7.2. |
შეჯამება - T4 vs T7 დნმ ლიგაზა
დნმ ლიგაზები არის ფერმენტების მნიშვნელოვანი კლასი, რომლებიც მონაწილეობენ მოლეკულურ კლონირებაში, რათა წარმოქმნან რეკომბინანტული დნმ-ის მოლეკულები, რომლებიც შეიცავს ინტერესის გენს. ლიგაციის რეაქცია არის ენერგიის გამოყენების რეაქცია და მიმდინარეობს ახალი კვლევითი კვლევები სიზუსტის გასაუმჯობესებლად ხელმისაწვდომი ლიგაზების მოდულაციის გზით. T4 და T7 დნმ ლიგაზები არის ორი ტიპის მნიშვნელოვანი დნმ ლიგაზას ფერმენტები, რომლებიც გამოიყენება მოლეკულურ ბიოლოგიურ ტექნიკაში. T7 დნმ ლიგაზა ასევე არის კვლევის შედეგი, რომელიც დაფუძნებულია T4 ინფიცირებული E. coli-დან გამოყოფილ პირველად ლიგაზაზე. T7 უფრო ეფექტურობასა და სიზუსტეს ასახავს თავისი ფუნქციის შესრულებაში მისი მცირე ზომის გამო. ეს არის განსხვავება T4 და T7 ლიგაზას შორის.
ჩამოტვირთეთ T4 vs T7 დნმ ლიგაზას PDF ვერსია
შეგიძლიათ ჩამოტვირთოთ ამ სტატიის PDF ვერსია და გამოიყენოთ იგი ოფლაინ მიზნებისთვის ციტირების შენიშვნების მიხედვით. გთხოვთ ჩამოტვირთოთ PDF ვერსია აქ სხვაობა T4 და T7 Ligase-ს შორის.
