კლენოუს ფრაგმენტსა და დნმ პოლიმერაზა 1-ს შორის მთავარი განსხვავებაა ის, რომ კლენოვის ფრაგმენტი არის დნმ პოლიმერაზა 1-ის დიდი ნაწილი, რომელსაც არ გააჩნია 5'-დან 3'-მდე ეგზონუკლეაზას აქტივობა, ხოლო დნმ პოლიმერაზა არის E. coli-ს ფერმენტი, რომელსაც აქვს სამივე. დომენები 5′-დან 3′-მდე ეგზონუკლეაზას აქტივობის ჩათვლით.
დნმ პოლიმერაზა არის ერთ-ერთი ძირითადი ფერმენტი, რომელიც მონაწილეობს ცოცხალ ორგანიზმებში დნმ-ის რეპლიკაციაში. არსებობს დნმ პოლიმერაზას ფერმენტის სხვადასხვა ფორმა, რომელიც გვხვდება ევკარიოტებსა და პროკარიოტებში ზომისა და ფორმის მიხედვით. დნმ პოლიმერაზა 1, 2 და 3 გვხვდება მხოლოდ პროკარიოტულ ორგანიზმებში და ისინი სხვადასხვა როლს ასრულებენ დნმ-ის რეპლიკაციაში.დნმ პოლიმერაზა 1-ს აქვს სამი დომენი 5'-დან 3' პოლიმერაზამდე, 3'-დან 5'-მდე ეგზონუკლეაზას აქტივობით და 5'-დან 3'-მდე ეგზონუკლეაზას აქტივობით. კლენოვის ფრაგმენტი არის დნმ პოლიმერაზა 1-ის პროტეოლიზური პროდუქტი. მას გააჩნია ხელუხლებელი დნმ პოლიმერაზა 1-ის 5-დან 3' პოლიმერაზა და 3'-დან 5' ეგზონუკლეაზური აქტივობები, მაგრამ მას აკლია 5'-დან 3' ეგზონუკლეაზას აქტივობა..
რა არის Klenow Fragment?
Klenow ფრაგმენტი არის დნმ პოლიმერაზა 1-ის დიდი ნაწილი. დნმ პოლიმერაზა 1-ისგან განსხვავებით, 5'-დან 3'-მდე ეგზონუკლეაზას აქტივობა არ ჩანს კლენოვის ფრაგმენტში, რადგან მას აკლია 5'-დან 3'-მდე წინა ეგზონუკლეაზას დომენი. კლენოვის ფრაგმენტები წარმოიქმნება დნმ პოლიმერაზა 1-ის პროტეაზასთან ერთად, რომელსაც ეწოდება სუბტილიზინი, რომელიც ცილის მომნელებელი ფერმენტია. ზოგიერთ აპლიკაციაში, კლენოვის ფრაგმენტის 3'-დან 5'-მდე ეგზონუკლეაზური აქტივობა არასასურველი ხდება. მისი ამოღება შესაძლებელია იმ გენში მუტაციის შემოღებით, რომელიც აკოდირებს კლენოვის ფრაგმენტს. შედეგად მიღებული ფერმენტი, რომელსაც აქვს მხოლოდ 5′-დან 3′ პოლიმერაზას აქტივობა, ცნობილია როგორც ეგზო-კლენოვის ფრაგმენტი.მორფოლოგიურად კლენოვის ფრაგმენტი ადამიანის მარჯვენა ხელს წააგავს. მას აქვს N-ტერმინალური 3'-5' ეგზონუკლეაზას დომენი და C-ტერმინალური პოლიმერაზას დომენი გამოყოფილი დაახლოებით 30 A-ით..
სურათი 01: კლენოვის ფრაგმენტი და დნმ პოლიმერაზა 1
კლენოვის ფრაგმენტი მნიშვნელოვანი ინსტრუმენტია მოლეკულურ ბიოლოგიურ ტექნიკაში. კლენოვის ფრაგმენტებს მრავალი გამოყენება აქვს. ისინი ძალზე მნიშვნელოვანია ბლაგვი კლონირებისას ბლაგვი ფრაგმენტების წარმოქმნის მიზნით. კლენოვის ფრაგმენტებს შეუძლიათ ამოიღონ 3′ გადახურვა ან შეავსონ 5′ გადახურვა ბლაგვი ბოლოების შესაქმნელად. უფრო მეტიც, კლენოვის ფრაგმენტები გამოიყენება ორჯაჭვიანი დნმ-ის სინთეზირებისთვის ერთი ჯაჭვიდან. გარდა ამისა, ისინი გამოიყენება რადიოაქტიურად ეტიკეტირებული ზონდების მოსამზადებლად დნმ-ზე დამოკიდებული დნმ პოლიმერაზას აქტივობის გამოყენებით 5'-დან 3'-მდე.
რა არის დნმ პოლიმერაზა 1?
დნმ პოლიმერაზა 1 (Pol 1) არის პროკარიოტებში ნაპოვნი ფერმენტი, რომელიც საჭიროა ბაქტერიული დნმ-ის რეპლიკაციისთვის. ეს არის დნმ პოლიმერაზას პირველი ტიპი, რომელიც აღმოაჩინა არტურ კორნბერგმა 1956 წელს. Pol 1 არის E. coli-ში ყველაზე გავრცელებული პოლიმერაზა. ის კოდირებულია გენით polA და შედგება 928 ამინომჟავისგან. იგი შედგება სამი დომენისგან. სამივე დომენი ასრულებს განსხვავებულ ფუნქციებს. ორი დომენი ახორციელებს 5'-დან 3'-მდე ეგზონუკლეაზას და 3'-დან 5'-მდე ეგზონუკლეაზას აქტივობას. ამ აქტივობის გამო, რომელსაც ფლობს Pol 1, ის პოპულარულია როგორც დნმ-ის აღმდგენი ფერმენტი, ვიდრე დნმ-ის რეპლიკაციური ფერმენტი. მესამე დომენს აქვს მრავალი პოლიმერიზაციის (5'-დან 3'-მდე) კატალიზების უნარი შაბლონის დნმ-ის გამოშვებამდე და ოკაზაკის ფრაგმენტების ერთმანეთთან დაკავშირება ახალი დნმ-ის შევსებით და რნმ პრაიმერების ამოღებით.
სურათი 02: დნმ პოლიმერაზა
E Coli-სგან იზოლირებული Pol 1 ფართოდ გამოიყენებოდა მოლეკულურ პროგრამებში. თუმცა, როგორც კი Taq Polymerase აღმოაჩინეს, მან შეცვალა E Coli Pol 1 PCR ტექნოლოგიაში. Taq პოლიმერაზა არის ერთგვარი თერმოსტაბილური დნმ პოლიმერაზა, რომელიც ეკუთვნის Pol 1.
რა მსგავსებაა კლენოვის ფრაგმენტსა და დნმ პოლიმერაზა 1-ს შორის?
- Klenow ფრაგმენტი არის დნმ პოლიმერაზა 1-ის დიდი ნაწილი.
- მათ აქვთ 5'-დან 3'-მდე დნმ დამოკიდებული დნმ-პოლიმერაზას აქტივობა და 3'-დან 5'-მდე ეგზონუკლეაზას აქტივობა, რომელიც შუამავლობს კორექტირებას.
- ისინი გამოიყენება მრავალი მიზნისთვის.
რა განსხვავებაა Klenow ფრაგმენტსა და დნმ პოლიმერაზა 1-ს შორის?
კლენოვის ფრაგმენტსა და დნმ პოლიმერაზა 1-ს შორის მთავარი განსხვავებაა ის, რომ კლენოვის ფრაგმენტს არ გააჩნია 5'-დან 3'-მდე ეგზონუკლეაზას აქტივობა, ხოლო დნმ პოლიმერაზა 1-ს აქვს 5'-დან 3'-მდე ეგზონუკლეაზას აქტივობა. ამრიგად, კლენოვის ფრაგმენტს აქვს ორი დომენი, ხოლო დნმ პოლიმერაზა 1-ს აქვს სამივე დომენი.
ქვემოთ ინფოგრაფიკა აჩვენებს უფრო მეტ დეტალს Klenow ფრაგმენტსა და დნმ პოლიმერაზა 1-ს შორის განსხვავების შესახებ.
რეზიუმე – კლენოვის ფრაგმენტი დნმ პოლიმერაზას წინააღმდეგ 1
დნმ პოლიმერაზა 1 არის E. coli-ს ფერმენტი, რომელსაც აქვს სამი დომენი, როგორც 5'-დან 3' პოლიმერიზაციის დომენი, 3'-დან 5'-მდე ეგზონუკლეაზას დომენი და 5'-დან 3'-მდე ეგზონუკლეაზას დომენი. კლენოვის ფრაგმენტი არის დნმ პოლიმერაზას დიდი ნაწილი. მას აკლია დნმ პოლიმერაზა 1-ის ერთი დომენი, რომელიც არის 5′-დან 3′ ეგზონუკლეაზას დომენი. Klenow ფრაგმენტსა და დნმ პოლიმერაზა 1-ს შორის მთავარი განსხვავება ისაა, რომ კლენოვის ფრაგმენტებს არ აქვთ 5'-დან 3'-მდე ეგზონუკლეაზას დომენი, ხოლო დნმ პოლიმერაზა 1-ს აქვს 5'-დან 3'-მდე ეგზონუკლეაზას დომენი..
