Klenow და T4 დნმ პოლიმერაზას შორის მთავარი განსხვავება ისაა, რომ Klenow ფრაგმენტი არის E. coli დნმ პოლიმერაზა 1-ის დიდი ფრაგმენტი, ხოლო T4 დნმ პოლიმერაზა არის ბაქტერიოფაგის T4 დნმ პოლიმერაზა 1.
დნმ პოლიმერაზები არის ფერმენტები, რომლებიც ახდენენ დნმ-ის ფორმირების კატალიზებას დეოქსირიბონუკლეოტიდების დამატებით, უკვე არსებული პრაიმერის 3'-OH ბოლოში. არსებობს სხვადასხვა ტიპის დნმ პოლიმერაზები. მოლეკულურ ბიოლოგიაში გამოყენებული დნმ პოლიმერაზების უმეტესობა პროკარიოტული დნმ პოლიმერაზებია. კლენოვის ფრაგმენტი და T4 დნმ პოლიმერაზა არის დნმ პოლიმერაზას ორი ტიპი, რომლებსაც აქვთ პროკარიოტული წარმოშობა. კლენოვის ფრაგმენტი არის დიდი ფრაგმენტი, რომელიც წარმოიქმნება E-ის გაყოფისგან.coli დნმ პოლიმერაზა 1 ორ ფრაგმენტად ბაქტერიული პროტეაზა სუბტილიზინის მიერ. T4 დნმ პოლიმერაზა არის ბაქტერიოფაგის T4 დნმ პოლიმერაზა 1. Klenow-ს და T4 დნმ პოლიმერაზას აქვთ 5'→3' პოლიმერაზა და 3'→5' ეგზონუკლეაზური აქტივობა. ორივეს არ გააჩნია 5'→3' ეგზონუკლეაზას აქტივობა, რაც მათ უფრო შესაფერისს ხდის მოლეკულურ ბიოლოგიაში მრავალი გამოყენებისთვის.
რა არის Klenow?
Klenow ფრაგმენტი არის დნმ პოლიმერაზა, რომელიც სასარგებლოა მოლეკულურ ბიოლოგიაში. როდესაც E. coli დნმ პოლიმერაზა 1 განიცდის პროტეოლიზურ მონელებას ბაქტერიული პროტეაზას, სუბტილიზინის მიერ, ეს იწვევს ორ ფრაგმენტს: ერთი არის დიდი ფრაგმენტი, ხოლო მეორე არის პატარა ფრაგმენტი. კლენოვის ფრაგმენტი არის დიდი ფრაგმენტი, რომლის ზომაა 68 kDa. კლენოვის ფრაგმენტს აქვს დნმ Pol I-ის 5'→3' პოლიმერაზა და 3'→5' ეგზონუკლეაზა (კორექტირება). კლენოვის ფრაგმენტი არ შეიცავს 5'→3' ეგზონუკლეაზას აქტივობას, რაც გამოიხატება მთლიანი ან უცვლელი E-ით.coli დნმ პოლიმერაზა 1. ხელსაყრელია, როდესაც საჭიროა მხოლოდ პოლიმერიზაციის აქტივობა. Klenow-ის ფრაგმენტები გამოიყენება 5’ გადახურვის შესავსებად, ზონდების სინთეზისთვის, დნმ-ის თანმიმდევრობის დასადგენად, ორჯაჭვიანი დნმ-ის სინთეზისთვის, cDNA მეორე ჯაჭვის სინთეზისთვის და ადგილზე მიმართული მუტაგენეზისთვის.
სურათი 01: კლენოვის ფრაგმენტი
გარკვეულ გამოყენებაში, კლენოვის ფრაგმენტის 3'→5' ეგზონუკლეაზას აქტივობა ასევე არასასურველი ხდება. მისი ამოღება შესაძლებელია იმ გენში მუტაციის შემოღებით, რომელიც კოდირებს კლენოვის ფრაგმენტს. შედეგად მიღებული კლენოვის ფრაგმენტი ცნობილია როგორც ეგზო-კლენოვის ფრაგმენტი. ამრიგად, ეგზო-კლენოვის ფრაგმენტს აქვს მხოლოდ E. coli პოლიმერაზა 1-ის 5'→3' პოლიმერაზული აქტივობა.
რა არის T4 დნმ პოლიმერაზა?
T4 დნმ პოლიმერაზა არის დნმ პოლიმერაზა, რომელიც აკატალიზებს დნმ-ის სინთეზს.ეს არის ბაქტერიოფაგი T4 კოდირებული ცილა. სტრუქტურულად, T4 დნმ პოლიმერაზა არის 898 ამინომჟავის ნარჩენი ცილა (მოლეკულური წონა 103,6 kDa). მას სჭირდება შაბლონი და პრაიმერი სინთეზის კატალიზებისთვის.
სურათი 02: T4 დნმ პოლიმერაზა
Klenow ფრაგმენტის მსგავსად, T4 დნმ პოლიმერაზას აქვს როგორც 5'→3' პოლიმერაზა და 3'→5' ეგზონუკლეაზური აქტივობა. უფრო მეტიც, მას აკლია 5'→3' ეგზონუკლეაზას აქტივობაც. T4 დნმ პოლიმერაზა სასარგებლოა დნმ-ის ფრაგმენტების 5'- ამობურცული ბოლოების შევსებაში. ის ასევე ხშირად გამოიყენება ორჯაჭვიანი დნმ-ის 5' ბოლო ან 3' ბოლო ეტიკეტირებისთვის. T4 დნმ პოლიმერაზა ხშირად გამოიყენება ბლაგვი კლონირებისთვის. T4 დნმ პოლიმერაზას 3'→5' ეგზონუკლეაზას (კორექტირების) აქტივობა უფრო ძლიერია (200-ჯერ მეტი), ვიდრე კლენოვის ფრაგმენტი. რაც მთავარია, T4 დნმ პოლიმერაზას აქვს მაღალი პროცესურობა (400 ნუკლეოტიდი წამში).
რა მსგავსებაა Klenow-სა და T4 დნმ პოლიმერაზას შორის?
- Klenow და T4 დნმ პოლიმერაზა არის ორი პროკარიოტული პოლიმერაზა.
- ორივე პოლიმერაზას აქვს 5'→3' პოლიმერაზა და 3'→5' ეგზონუკლეაზური აქტივობა.
- ისინი არ ავლენენ 5'→3' ეგზონუკლეაზას აქტივობას.
- ორივე ფერმენტს სჭირდება შაბლონი და პრაიმერი დნმ-ის სინთეზის კატალიზებისთვის.
- ამ ფერმენტების ინაქტივაცია შესაძლებელია 75 0
რა განსხვავებაა Klenow-სა და T4 დნმ პოლიმერაზას შორის?
Klenow-სა და T4 დნმ პოლიმერაზას შორის მთავარი განსხვავებაა თითოეული ფერმენტის წარმოშობა. კლენოვის ფრაგმენტი წარმოიშვა ბაქტერიისგან, ხოლო T4 დნმ პოლიმერაზა წარმოიშვა ბაქტერიოფაგისგან, რომელიც არის ვირუსი. T4 დნმ პოლიმერაზას აქვს კლენოვის ფრაგმენტთან შედარებით მაღალი პროცესურობა. უფრო მეტიც, T4 დნმ პოლიმერაზას აქვს ძლიერი კორექტირების აქტივობა, ვიდრე კლენოვის ფრაგმენტი.ამრიგად, ეს არის კიდევ ერთი განსხვავება Klenow-სა და T4 დნმ პოლიმერაზას შორის.
ქვემოთ მოცემული ინფოგრაფიკა ჩამოთვლის მეტ განსხვავებას Klenow-სა და T4 დნმ პოლიმერაზას შორის ცხრილის სახით.
რეზიუმე - კლენოვი vs T4 დნმ პოლიმერაზა
Klenow ფრაგმენტი არის E. coli დნმ პოლიმერაზა 1-ის დიდი ფრაგმენტი. მას აქვს მხოლოდ 5'→3' პოლიმერაზა და 3'→5' ეგზონუკლეაზური აქტივობა. მას აკლია 5'→3' ეგზონუკლეაზური აქტივობა უცვლელი E. coli დნმ pol 1. ამიტომ, კლენოვის ფრაგმენტი არის ბაქტერიული პოლიმერაზა. მეორეს მხრივ, T4 დნმ პოლიმერაზა არის პოლიმერაზა, რომელიც კოდირებულია ბაქტერიოფაგის T4-ით. კლენოვის ფრაგმენტის მსგავსად, ის შეიცავს როგორც 5'→3' პოლიმერაზას, ასევე 3'→5' ეგზონუკლეაზას აქტივობას და მას აკლია 5'→3' ეგზონუკლეაზური აქტივობა. თუმცა, T4 დნმ პოლიმერაზას აქვს მაღალი პროცესურობა და მაღალი კორექტირების აქტივობა, ვიდრე კლენოვის ფრაგმენტი.ასე რომ, ეს არის მთავარი განსხვავება Klenow-სა და T4 დნმ პოლიმერაზას შორის.
