GFP-სა და EGFP-ს შორის მთავარი განსხვავება ისაა, რომ GFP არის ველური ტიპის ცილა, რომელიც ჩართულია არაძუძუმწოვრების უჯრედების მოლეკულურ კლონირებაში, ხოლო EGFP არის GFP-ის გაუმჯობესებული ან ინჟინერიული ტიპი, რომელიც შეიძლება გამოყენებულ იქნას ძუძუმწოვრების უჯრედებზე..
მოლეკულური კლონირება არის მოწინავე ტექნიკა, რომელსაც მეცნიერები უზომოდ იყენებენ ცილების გამოხატვისას რეკომბინანტული ტექნოლოგიით. რეკომბინანტული დნმ-ის ტექნოლოგიაში აუცილებელია რეკომბინანტული ვექტორის წარმატებით გარდაქმნა მასპინძელ ორგანიზმად. აქედან გამომდინარე, ტრანსფორმაციის პროცესის დროს უნდა განისაზღვროს და დადასტურდეს ინტერესის გენი გარდაიქმნა თუ არა მასპინძელში. ამის შესაფასებლად მოლეკულური ბიოლოგები იყენებენ რამდენიმე ტექნიკას.ამ ტექნიკიდან ერთი არის რეპორტიორის გენი. ეს რეპორტიორი გენები მოქმედებენ როგორც არჩევადი მარკერები სწორი ტრანსფორმანტების შესარჩევად. ამრიგად, მწვანე ფლუორესცენტური პროტეინი (GFP) და გაძლიერებული მწვანე ფლუორესცენტური პროტეინი (EGFP) არის ორი მომხსენებელი ცილა, რომელიც გამოიყენება მოლეკულურ კლონირებაში.
რა არის GFP?
GFP არის ველური ტიპის ცილა, რომელიც შეიცავს 238 ამინომჟავის ნარჩენებს და ამინომჟავების თანმიმდევრობების რამდენიმე შერჩეულ რეგიონს, რომლებიც განასხვავებენ მას სხვა ფლუორესცენტური ცილებისგან. გარდა ამისა, ეს ველური ტიპის ცილა თავდაპირველად იზოლირებული იყო Aequorea Victoria-სგან; მედუზის სახეობა. თუმცა, ბუნებრივ მოვლენებში, მედუზამ გარკვეული სტიმულის საპასუხოდ მწვანე ფერის ფლუორესცენციის გამომუშავება შეძლო.
ადრე ამ კონცეფციამ გააოცა მეცნიერები და მათ გადაწყვიტეს გამოეყენებინათ იგი რეკომბინანტულ დნმ ტექნოლოგიებზე. შესაბამისად, მეცნიერებმა გამოიყენეს ველური ტიპის გენის ეს მუტანტური ფორმა, როგორც მომხსენებელი გენი გენის ექსპრესიის კვლევებში. GFP-ის ველური ტიპის გენს შეუძლია აწარმოოს პროტეინი, რომელიც იძლევა ფლუორესცენციას ოთახის ტემპერატურაზე ან ულტრაიისფერი შუქის ქვეშ.ამიტომ ტრანსფორმანტებში ჩასმისას იგი გამოხატავს და წარმოქმნის ფლუორესცენციას. თუ ფლუორესცენცია ხდება ტრანსფორმაციის პროცესის შემდეგ, ეს ადასტურებს ტრანსფორმაციის პროცესის წარმატებას. მარტივი სიტყვებით, ფლუორესცენციული ემისია მიუთითებს ვექტორის წარმატებულ ტრანსფორმაციაზე, რომელიც ატარებს ინტერესის გენს მასპინძელში.
სურათი 01: GFP
ამ მიზეზის გამო, GFP მოქმედებს როგორც გენის ექსპრესიის in vivo მარკერი. ამჟამად, გენეტიკური ინჟინერიის ტექნიკა გამოიყენება GFP-ის წარმოებისთვის. ასევე, ხელმისაწვდომია GFP-ის მრავალი გაუმჯობესებული ვერსია, როგორიცაა EGFP. ამრიგად, ეს იძლევა GFP-ის ეფექტურ გამოყენებას მოლეკულური კლონირებისა და გენის ექსპრესიის კვლევებში.
რა არის EGFP?
გაძლიერებული მწვანე ფლუორესცენტური პროტეინი ან EGFP არის GFP-ის გაუმჯობესებული ვერსია.მარტივი სიტყვებით, ჩვენ შეგვიძლია განვსაზღვროთ EGFP, როგორც ველური ტიპის GFP-ის ინჟინერირებული ვერსია. როდესაც GFP-ის ველური ტიპის გენი მუტაციას ახდენს, ის აწარმოებს სასარგებლო ეფექტებს. აქედან გამომდინარე, GFP-ის მუტაციური გენი იძლევა ახალი სიმბოლოების გამოხატვის საშუალებას და ამის შედეგად ჩვენ შეგვიძლია შევქმნათ გაძლიერებული GFP გაუმჯობესებული მახასიათებლებით. გარდა ამისა, ჩვენ შეგვიძლია წარმატებით შემოვიტანოთ მუტაციები ველური ტიპის GFP გენში დასხივების ან ქიმიური მეთოდების გამოყენებით. ეს მუტაციური გენები წარმოქმნიან EGFP-ს, რომელსაც აქვს უფრო სასარგებლო მახასიათებლები.
სურათი 02: EGFP
EGFP-ის გაუმჯობესებული მახასიათებლები შემდეგია;
- შეუძლია უფრო ძლიერი ფლუორესცენციის სიგნალების გამოსხივება.
- აქვს მაღალი მგრძნობელობა.
- შეიძლება მისი გამოყენება ძუძუმწოვართა უჯრედებზე პროკარიოტებისა და სხვა ქვედა დონის ევკარიოტების ნაცვლად.
- ასევე უზრუნველყოფს პროდუქტის სისუფთავის გაზრდას.
ამიტომ, GFP-თან შედარებით, EGFP არის სასურველი არჩევანი გენის ექსპრესიის კვლევებისთვის. თუმცა, პროდუქტი უფრო ძვირია GFP-სთან შედარებით.
რა მსგავსებაა GFP-სა და EGFP-ს შორის?
- GFP და EGFP არის ორი ცილა, რომელსაც აქვს მწვანე ფერის გამოსხივების უნარი
- ამიტომ, ორივე ფუნქციონირებს როგორც მომხსენებელი პროტეინი გენის ექსპრესიის კვლევებში.
- ასევე, შესაძლებელია ორივეს სინთეზირება რეკომბინანტული დნმ-ის ტექნოლოგიის გამოყენებით.
- უფრო მეტიც, ადვილია ამ ორი ტიპის შემდგომი მუტაცია გაუმჯობესებული ფორმების სინთეზირებისთვის.
რა განსხვავებაა GFP-სა და EGFP-ს შორის?
რეპორტიორი გენი არის გენი, რომელიც მიმაგრებულია რეკომბინანტული დნმ-ის ტექნოლოგიაში საინტერესო გენთან. ის სიგნალს აძლევს რეკომბინანტული ვექტორის წარმატებულ ტრანსფორმაციას მასპინძელში.აქ, GFP და EGFP არის ორი ტიპის მწვანე ფლორესცენტური ცილები, რომლებიც მუშაობენ როგორც რეპორტიორი ცილები. ამასთან, მთავარი განსხვავება GFP-სა და EGFP-ს შორის არის ის, რომ GFP არის ველური ტიპი, ხოლო EGFP არის GFP-ის ინჟინერირებული ვერსია. გარდა ამისა, EGFP-ს აქვს უფრო მომგებიანი მახასიათებლები, ვიდრე GFP. მაგალითად, EGFP აწარმოებს უფრო ძლიერ ფლუორესცენტულ შუქს და უფრო მგრძნობიარეა ვიდრე GFP. კიდევ ერთი განსხვავება GFP-სა და EGFP-ს შორის არის სისტემები, რომლებშიც შეგვიძლია გამოვიყენოთ ისინი. არაძუძუმწოვრების სისტემები იყენებენ GFP-ს, ხოლო ძუძუმწოვრების სისტემები იყენებენ EGFP-ს.
ქვემოთ მოცემული ინფოგრაფიკა წარმოგიდგენთ განსხვავებას GFP-სა და EGFP-ს შორის ცხრილის სახით.
რეზიუმე – GFP vs EGFP
GFP და EGFP არის მომხსენებელი ცილები მოლეკულური კლონირებისა და გენის ექსპრესიის კვლევებში. GFP არის ველური ტიპის ცილა, რომელიც არის მწვანე ფლუორესცენტური ცილა.ცილა თავდაპირველად იზოლირებული იყო მედუზა Aequorea victoria-სგან. ამის საპირისპიროდ, EFGP არის GFP ცილის გაძლიერებული ფორმა. ეს არის ველური ტიპის მუტანტი გაუმჯობესებული მახასიათებლებით. აქედან გამომდინარე, EFGP-ს აქვს უფრო მაღალი სიგნალის სიძლიერე და უფრო მაღალი მგრძნობელობა. აქედან გამომდინარე, შეგვიძლია გამოვიყენოთ ძუძუმწოვრების ვექტორებზე. ამის საპირისპიროდ, GFP გამოიყენება ძირითადად მხოლოდ არა ძუძუმწოვრების ვექტორებზე. ზოგადად, ეს არის განსხვავება GFP-სა და EGFP-ს შორის.
