PCR vs რეალურ დროში PCR
PCR ან პოლიმერაზული ჯაჭვური რეაქცია არის რევოლუციური აღმოჩენა თანამედროვე მოლეკულურ ბიოლოგიაში, რომელიც პირველად შეიმუშავა ქიმიკოსმა კარი მალისმა 1983 წელს. ის საშუალებას აძლევს კომპლექსურ დნმ-ში ცალკეული თანმიმდევრობის გაძლიერებას ანალიზისთვის. PCR-ის ძირითადი იდეა ისაა, რომ ორი პრაიმერი, რომლებიც ავსებენ დნმ-ის მიმდევრობის საპირისპირო ძაფებს, ორიენტირებულია ერთმანეთზე; პრაიმერები წარმოქმნიან დამატებით ძაფებს, რომელთაგან თითოეული შეიცავს მეორე პრაიმერს. აქედან გამომდინარე, შედეგი არის დნმ-ის შესაბამისი თანმიმდევრობის დიდი რაოდენობა, რომელიც მდებარეობს ორ პრაიმერს შორის. დნმ პოლიმერაზას ფერმენტი გამოიყენება PCR-ში პრაიმერების გასაგრძელებლად.დნმ პოლიმერაზა არის თერმოსტაბილური ფერმენტი და მას აქვს უნარი გადარჩეს მაღალ ტემპერატურაზე (94-დან 95 °C-მდე), რომელიც გამოიყენება შაბლონის დნმ-ის დენატურაციისთვის.
PCR მოიცავს სამ საფეხურს, კერძოდ, დენატურაციის განმეორებით რაუნდებს, პრაიმერების ანეილირებას და დნმ-ის სინთეზს. ამ რეაქციის შესასრულებლად გამოიყენება თერმოციკლერის მანქანა, რათა ის დაპროგრამდეს ტემპერატურის სწრაფად და ზუსტად შესაცვლელად. PCR-ის გამოყენებაა კრიმინალური გამოძიება, დნმ-ის თითის ანაბეჭდი, პათოგენების აღმოჩენა და ადრეული ადამიანის სახეობების დნმ-ის ანალიზი.
რა არის ჩვეულებრივი PCR?
არის ჩვეულებრივი PCR-ის სამი ძირითადი ეტაპი, კერძოდ; დნმ-ის გაძლიერების ეტაპი, PCR-ის გამოყოფა და პროდუქტების გამოვლენა. დნმ-ის სეგმენტების გამოყოფა ჩვეულებრივ ხდება აგაროზის გელის ელექტროფორეზით. შემდეგ პროდუქტები იღებება ეთეიდუიმ ბრომიდით. საბოლოოდ, გამოვლენა მიიღწევა ულტრაიისფერი შუქის ქვეშ გელებზე ზოლების ვიზუალიზაციის გზით. ამიტომ, ჩვეულებრივი PCR-ის საბოლოო შედეგები არ არის გამოხატული რიცხვებად.ჩვეულებრივ PCR-ს შეუძლია მხოლოდ ერთი პარამეტრის აღმოჩენა.
რა არის რეალურ დროში PCR?
რეალურ დროში PCR შეუძლია აღმოაჩინოს პროდუქტების გაძლიერება, რადგან პროდუქტები სინთეზირდება. ტექნოლოგიის განვითარებით, PCR გახდა ძალიან პოპულარული ტექნიკა, განსაკუთრებით საკვებში ბაქტერიების გამოვლენისა და იდენტიფიკაციისთვის. რეალურ დროში PCR იყენებს ფლორესცენტური საღებავის სისტემას და თერმოციკლერს, რომელიც აღჭურვილია ფლუორესცენტური გამოვლენის შესაძლებლობით.
რა განსხვავებაა ჩვეულებრივ PCR-სა და რეალურ დროში PCR-ს შორის?
• ჩვეულებრივი PCR უფრო შრომატევადია, რადგან ის იყენებს გელის ელექტროფორეზის გაძლიერებული PCR პროდუქტების ანალიზს. ამის საპირისპიროდ, რეალურ დროში PCR ნაკლებ დროს მოითხოვს, რადგან მას შეუძლია აღმოაჩინოს გაძლიერება რეაქციის ადრეულ ფაზებზე.
• რეალურ დროში PCR აგროვებს მონაცემებს PCR-ის ექსპონენციალური ზრდის ფაზაში, ხოლო ტრადიციული PCR აგროვებს მონაცემებს რეაქციის ბოლო წერტილში.
• ჩვეულებრივი PCR-ის საბოლოო წერტილის შედეგები შეიძლება არ იყოს ძალიან ზუსტი, მაგრამ რეალურ დროში PCR-ის შედეგები ძალიან ზუსტია.
• რეალურ დროში PCR უფრო მგრძნობიარეა, ვიდრე ჩვეულებრივი PCR.
• ჩვეულებრივ PCR-ს აქვს ძალიან ცუდი გარჩევადობა, ხოლო რეალურ დროში PCR-ს შეუძლია აღმოაჩინოს ძალიან მცირე ცვლილებები მაღალი გარჩევადობის გამო.
• ჩვეულებრივი PCR-ის ბოლო წერტილის აღმოჩენას აქვს მოკლე დინამიური დიაპაზონი, ხოლო რეალურ დროში PCR გამოვლენას აქვს ფართო დინამიური დიაპაზონი.
• ჩვეულებრივი PCR-ისგან განსხვავებით, ავტომატური გამოვლენის ტექნიკა გვხვდება რეალურ დროში PCR-ში.
• ჩვეულებრივი PCR არის მეტად დახვეწილი და შრომატევადი, ვიდრე რეალურ დროში.
• რეალურ დროში PCR-ისგან განსხვავებით, ჩვეულებრივი PCR არ შეუძლია განასხვავოს მკვდარი და ცოცხალი ბაქტერიები.
• რეალურ დროში PCR იყენებს ფლუორესცენტურ საღებავ სისტემას პროდუქტების აღმოსაჩენად, ხოლო ჩვეულებრივი PCR იყენებს ეთიდიუმის ბრომიდს და ულტრაიისფერ შუქს აგაროზის გელის ზოლების ვიზუალიზაციისთვის.
