სხვაობა ჩრდილოეთ სამხრეთისა და დასავლეთის ბლოტებს შორის

2024 ავტორი: Alex Aldridge | [email protected]. ბოლოს შეცვლილი: 2023-12-17 13:43

ძირითადი განსხვავება – ჩრდილოეთი vs სამხრეთ vs დასავლური ბლოტი

დნმ-ის, რნმ-ის და ცილების სპეციფიკური თანმიმდევრობების გამოვლენა აუცილებელია მოლეკულური ბიოლოგიის სხვადასხვა ტიპის კვლევებისთვის. გელის ელექტროფორეზი არის ტექნიკა, რომელიც გამოყოფს დნმ-ს, რნმ-ს და ცილებს მათი ზომის მიხედვით. გელის პროფილებიდან დნმ-ის კონკრეტული თანმიმდევრობა, რნმ-ის თანმიმდევრობა ან ცილა გამოვლენილია სპეციალური ტექნიკით, რომელსაც ეწოდება ბლოტი და ჰიბრიდიზაცია ეტიკეტირებული ზონდებით. არსებობს სამი განსხვავებული ტიპის blotting მეთოდი, კერძოდ სამხრეთი, ჩრდილოეთი და დასავლური. მთავარი განსხვავება ჩრდილოეთ სამხრეთსა და დასავლეთს შორის მდგომარეობს იმ მოლეკულის ტიპში, რომელსაც იგი აღმოაჩენს ნიმუშიდან. Southern blotting არის მეთოდი, რომელიც აღმოაჩენს დნმ-ის სპეციფიკურ თანმიმდევრობას დნმ-ის ნიმუშიდან. ჩრდილოეთის ბლოტი არის ტექნიკა, რომელიც აღმოაჩენს რნმ-ის სპეციფიკურ თანმიმდევრობას რნმ-ის ნიმუშიდან. Western blotting არის მეთოდი, რომელიც განსაზღვრავს სპეციფიკურ პროტეინს ცილის ნიმუშიდან.

რა არის Southern Blotting?

Southern blotting ტექნიკა შეიმუშავა E. M. Southern-ის მიერ 1975 წელს დნმ-ის სპეციფიკური თანმიმდევრობის იდენტიფიცირებისთვის დნმ-ის ნიმუშიდან. ეს არის პირველი blotting ტექნიკა, რომელიც დაინერგა მოლეკულურ ბიოლოგიაში. მან შესაძლებელი გახადა დნმ-დან კონკრეტული გენების, დნმ-ის სპეციფიკური ფრაგმენტების გამოვლენა და ა.შ. სამხრეთის ბლოტის ტექნიკაში ჩართულია რამდენიმე ნაბიჯი. ისინი შემდეგია.

1. დნმ იზოლირებულია ნიმუშიდან და შეიწოვება შემაკავებელი ენდონუკლეაზებით.
2. მონელებული ნიმუში გამოყოფილია აგაროზის გელის ელექტროფორეზით.
3. დნმ-ის ფრაგმენტები გელში დენატურირებულია ერთ ძაფებად ტუტე ხსნარის გამოყენებით.
4. ერთჯაჭვიანი დნმ გადადის ნიტროცელულოზის ფილტრის მემბრანაში კაპილარული გადაცემით.
5. გადატანილი დნმ მუდმივად ფიქსირდება მემბრანაზე.
6. მემბრანაზე დაფიქსირებული დნმ ჰიბრიდირებულია ეტიკეტირებული ზონდებით.
7. დაუკავშირებელი დნმ გამოირეცხება მემბრანიდან გამორეცხვით.
8. რენტგენის ფილმი ექვემდებარება მემბრანას და მზადდება ავტორადიოგრაფი.

საუტერნ ბლოტი გამოიყენება მოლეკულური ბიოლოგიის სხვადასხვა ასპექტისთვის. ის სასარგებლოა RFLP რუკების, სასამართლო კვლევების, დნმ-ის მეთილაციის დროს გენის ექსპრესიაში, მუტაციური გენების გამოვლენაში გენეტიკურ დარღვევებში, დნმ-ის თითის ანაბეჭდის და ა.შ.

სურათი 01: სამხრეთის ბლომების ტექნიკა

რა არის Northern Blotting?

Northern blotting არის მეთოდი, რომელიც შექმნილია ნიმუშიდან კონკრეტული რნმ-ის თანმიმდევრობის ან mRNA თანმიმდევრობის გამოსავლენად გენის ექსპრესიის შესასწავლად. ეს ტექნიკა შეიმუშავეს ალვაინმა, კემპმა და სტარკმა 1979 წელს. იგი განსხვავდება სამხრეთისა და ვესტერნ ბლოტის ტექნიკისგან რამდენიმე საფეხურის გამო. თუმცა, ეს ტექნიკა ასევე შესრულებულია გელის ელექტროფორეზის, ბლოტისა და ჰიბრიდიზაციის გზით სპეციფიკური ეტიკეტირებული ზონდებით და გამოვლენით. ჩრდილოეთის ბლოტის ტექნიკა ხორციელდება შემდეგნაირად.

1. რნმ ამოღებულია ნიმუშიდან და გამოიყოფა გელის ელექტროფორეზით.
2. რნმ გადადის გელიდან ბლოტიან მემბრანაზე და ფიქსირდება.
3. მემბრანა მუშავდება ეტიკეტირებული ზონდით, რომელიც მომზადებულია cDNA-დან ან რნმ-დან (ზონდი ავსებს ნიმუშის სპეციფიკურ თანმიმდევრობას).
4. ზონდი ინკუბირებულია მემბრანასთან, რათა დაუკავშირდეს კონკრეტულ თანმიმდევრობას.
5. ჩამოუკიდებელი ზონდები ჩამორეცხილია.
6. ჰიბრიდირებული ფრაგმენტები აღმოჩენილია ავტორადიოგრაფიით.

Northern blotting არის მნიშვნელოვანი ინსტრუმენტი ჰიბრიდირებული mRNA-ს გამოვლენისა და რაოდენობრივად განსაზღვრაში, რნმ-ის დეგრადაციის შესწავლაში, რნმ-ის ნახევარგამოყოფის პერიოდის შეფასებაში, რნმ-ის შერწყმის გამოვლენაში, გენის ექსპრესიის შესწავლაში და ა.შ.

სურათი 02: Northern Blotting

რა არის Western Blotting?

ვესტერნ ბლოტი არის ცილოვანი ნარევიდან სპეციფიკური ცილის გამოვლენის მეთოდი ეტიკეტირებული ანტისხეულების გამოყენებით. ამიტომ, ვესტერნ ბლოტი ასევე ცნობილია, როგორც იმუნობლოტი. ეს ტექნიკა დაინერგა Towbin-მა და სხვებმა 1979 წელს და ახლა ის ჩვეულებრივ ტარდება ლაბორატორიებში ცილების ანალიზისთვის. ნაბიჯები შემდეგია.

1. პროტეინები ამოღებულია ნიმუშიდან
2. პროტეინები გამოყოფილია მათი ზომის მიხედვით პოლიაკრილამიდის გელის ელექტროფორეზის გამოყენებით
3. გამოყოფილი მოლეკულები გადადის PVDF მემბრანაში ან ნიტროცელულოზის მემბრანაში ელექტროპორაციის გზით
4. მემბრანა დაბლოკილია ანტისხეულებთან არასპეციფიკური კავშირისთვის
5. გადატანილი ცილები დაკავშირებულია პირველადი ანტისხეულებით (ენზიმებით მონიშნული ანტისხეულები).
6. მემბრანა ირეცხება არასპეციფიკურად შეკრული პირველადი ანტისხეულების მოსაშორებლად
7. შეკრული ანტისხეულების აღმოჩენა ხდება სუბსტრატის დამატებით და წარმოქმნილი ფერადი ნალექის გამოვლენით

Western blotting სასარგებლოა ადამიანის შრატის ნიმუშში აივ-ის საწინააღმდეგო ანტისხეულების გამოსავლენად. Western blot ასევე შეიძლება გამოყენებულ იქნას როგორც დამადასტურებელი ტესტი B ჰეპატიტის ინფექციისთვის და საბოლოო ტესტი შეშლილი ძროხის დაავადებისთვის.

სურათი 03: Western Blotting

რა განსხვავებაა ჩრდილოეთ სამხრეთისა და დასავლეთის ბლოტინგს შორის?

ჩრდილოეთი vs სამხრეთ vs დასავლური ბლოტი
გამოვლენილი მოლეკულის ტიპი
Northern Blotting	Northern blotting აღმოაჩენს რნმ-ის სპეციფიკურ თანმიმდევრობას რნმ-ის ნიმუშიდან.
სამხრეთის ბლოტი	Southern blotting აღმოაჩენს დნმ-ის სპეციფიკურ თანმიმდევრობას დნმ-ის ნიმუშიდან.
Western Blotting	Western blotting აღმოაჩენს სპეციფიკურ ცილას ცილის ნიმუშიდან.
გელის ტიპი
Northern Blotting	ეს იყენებს აგაროზა/ფორმალდეჰიდის გელს.
სამხრეთის ბლოტი	ეს იყენებს აგაროზის გელს.
Western Blotting	ეს იყენებს პოლიაკრილამიდის გელს.
ბლოტირების მეთოდი
Northern Blotting	ეს არის კაპილარული გადაცემა.
სამხრეთის ბლოტი	ეს არის კაპილარული გადაცემა.
Western Blotting	ეს არის ელექტრული გადაცემა.
გამოყენებული ზონდები
Northern Blotting	cDNA ან რნმ-ის ზონდები მონიშნული რადიოაქტიურად ან არარადიოაქტიურად.
სამხრეთის ბლოტი	დნმ-ის ზონდები მონიშნულია რადიოაქტიურად ან არარადიოაქტიურად.
Western Blotting	პირველადი ანტისხეულები გამოიყენება ზონდებად.
გამოვლენის სისტემა
Northern Blotting	ეს კეთდება ავტორადიოგრაფის ან სინათლის ან ფერის ცვლილების გამოვლენის გამოყენებით.
სამხრეთის ბლოტი	ეს კეთდება ავტორადიოგრაფის გამოყენებით, სინათლის ან ფერის ცვლილების გამოვლენით.
Western Blotting	ეს კეთდება სინათლის ან ფერის ცვლილების გამოვლენის გამოყენებით.

რეზიუმე – ჩრდილოეთი vs სამხრეთ vs დასავლური ბლოტი

ბლოტირება არის სპეციალური ტექნიკა, რომელიც შემუშავებულია ნიმუშებიდან სპეციფიკური დნმ-ის, რნმ-ის ან ცილის იდენტიფიკაციისთვის.არსებობს სამი ცალკეული blotting პროცედურა, კერძოდ ჩრდილოეთი, სამხრეთი და დასავლური, კონკრეტული ტიპის მოლეკულის გამოსავლენად. Northern blotting ტექნიკა შექმნილია რნმ-ის სპეციფიკური თანმიმდევრობის გამოსავლენად რნმ-ის ნარევიდან. სამხრეთის ბლოტირების ტექნიკა იძლევა დნმ-ის სპეციფიკური თანმიმდევრობის გამოვლენას დნმ-ის ნიმუშიდან და ვესტერნი ბლოტირების ტექნიკა შემუშავებულია პროტეინის ნარევიდან სპეციფიკური ცილის იდენტიფიცირებისთვის.