ძირითადი განსხვავება - თბილი და ცივი ტრიფსინიზაცია
თბილი და ცივი ტრიფსინიზაცია არის ორი მეთოდი, რომელიც გამოიყენება ცხოველთა უჯრედების კულტივირებაში უჯრედების ფერმენტულ დაშლაში. მთავარი განსხვავება თბილ და ცივ ტრიფსინიზაციას შორის, როგორც სახელები გვთავაზობს, დამოკიდებულია ტემპერატურაზე, რომელზედაც ტრიპსინს ემატება უჯრედული დაშლა. თბილი ტრიფსინიზაცია ხდება უფრო მაღალი ტემპერატურის პირობებში (36,5 – 37 0C), ხოლო ცივი ტრიფსინიზაცია ხდება დაბალი ტემპერატურის პირობებში.
ცხოველური უჯრედების პირველადი უჯრედების კულტივირების პროცესში გამოყენებულია სამი ძირითადი მეთოდი, რომელიც წარმატებული აღმოჩნდა.სამი მეთოდი მოიცავს უჯრედების მექანიკურ დაშლას, უჯრედების ფერმენტულ დაშლას და პირველადი ექსპლანტაციის ტექნიკას. უჯრედების ფერმენტული დაშლა იწვევს უჯრედების იზოლაციას და ეს ხდება ცილის დამშლელი ფერმენტის ტრიპსინის მიერ. ამიტომ, ეს პროცესი ცნობილია როგორც ტრიფსინიზაცია. ტრიფსინიზაცია შეიძლება განხორციელდეს ორ სხვადასხვა პირობებში, კერძოდ, თბილი ტრიფსინიზაცია და ცივი ტრიფსინიზაცია. თბილი ტრიფსინიზაცია არის უჯრედების ტრიფსინის დამუშავების მეთოდი თბილ პირობებში 36,5 – 37 0C ტემპერატურაზე. ცივი ტრიფსინიზაცია არის ტრიფსინის დამუშავების პროცესი, რომელიც ხდება უფრო ცივ პირობებში, სასურველია ყინულის პირობებში ძალიან დაბალი ტემპერატურის შენარჩუნება.
რა არის თბილი ტრიფსინიზაცია?
ტრიფსინიზაცია შეიძლება გაკეთდეს უჯრედული კომპონენტების დაშლის მიზნით, რათა მოხდეს უჯრედების იზოლირება პირველადი უჯრედული კულტურის წარმოებისთვის. ტრიფსინი არის ცილის დეგრადაციის ფერმენტი და ფერმენტული ნარევი, რომელიც გამოიყენება ტრიფსინიზაციაში, შეიძლება იყოს ნედლი ექსტრაქტი ან გაწმენდილი პროდუქტი.ამბობენ, რომ ნედლი ექსტრაქტი უფრო ეფექტურია ცილების ლიზისა და უჯრედების დაშლაში, რადგან ის შეიცავს სხვა დეგრადირებულ ფერმენტებს.
თბილი ტრიფსინიზაცია არის ყველაზე ხშირად გამოყენებული ფერმენტული მეთოდი უჯრედების დაშლისთვის, რომელიც ხდება უფრო მაღალი ტემპერატურის პირობებში. ტრიფსინიზაციით დამუშავებამდე სასურველ ქსოვილს ჭრიან პატარა ნაჭრებად. ეს ხელს უწყობს ადვილად დაშლის პროცესს. შემდეგ დაჭრილი ქსოვილი ირეცხება სპეციალურ საშუალებებში, რომელიც ცნობილია როგორც Dissection Basal S alt..
სარეცხი ეტაპის დასრულების შემდეგ უჯრედები გარდაიქმნება კოლბაში, რომელიც შეიცავს აქტიურ ფერმენტს, ეს არის ტრიფსინი. ვინაიდან ეს ტექნიკა გულისხმობს თბილ ტრიფსინიზაციის პროტოკოლს, ტრიპსინი მოთავსებულია დაახლოებით 37 0C ტემპერატურაზე დაახლოებით ოთხი საათის განმავლობაში.
სურათი 01: ტრიპსინი
შიგთავსის შერევა და აჟიტირება ხდება ცენტრიფუგაციის მეთოდების გამოყენებით პროტოკოლის გასაადვილებლად და დაშლის პროცესის დასაჩქარებლად. მას შემდეგ რაც მიიღწევა რეკომენდებული დრო, უჯრედები შეიძლება მიღებულ იქნეს სუპერნატანტიდან. სუპერნატანტიდან მიღებული უჯრედები ინკუბირებულია კონკრეტულ ტემპერატურაზე და დროზე.
რა არის ცივი ტრიფსინიზაცია?
ცივი ტრიფსინიზაცია არის ტრიფსინიზაციის სხვა სახეობა, რომელიც ხდება ცივ პირობებში. ამ ტექნიკით, დაჭრილ და გარეცხილ უჯრედებს ათავსებენ ყინულზე ფლაკონებში და შემდეგ ატენიანებენ ტრიფსინს. გაჟღენთის პერიოდი გაცილებით გრძელია - დაახლოებით 6-24 საათი.
გაჟღენთის პროცედურის დასრულების შემდეგ, ტრიპსინი ამოღებულია უჯრედის ლიზატიდან და ქსოვილის ნაჭრები შემდგომში ინკუბირებულია 37 0C ტემპერატურაზე დაახლოებით 20-30 წუთის განმავლობაში. უჯრედების დაშლა ხდება ქსოვილის ნარევის განმეორებითი პიპეტირების შედეგად.ეს საშუალებას მისცემს უჯრედებს დაშორდნენ მემბრანიდან და მოვიდნენ ზენატანთან. მას შემდეგ, რაც უჯრედები სუპერნატანტშია, ისინი ინკუბირებულია და იზრდებიან სასურველ ტემპერატურაზე და დროში.
ცივი ტრიფსინიზაციის მეთოდს რამდენიმე უპირატესობა აქვს
- სიცოცხლისუნარიანი უჯრედების უფრო მაღალი მოსავლიანობა, რადგან უჯრედების დაზიანება მინიმუმამდეა დაყვანილი. უჯრედის დაზიანება მინიმუმამდეა დაყვანილი ცენტრიფუგაციის საფეხურების გამოუყენებლობის შემთხვევაში.
- უაღრესად მოსახერხებელი მეთოდი.
- ნაკლები შრომატევადი.
ცივი ტრიფსინიზაციის მეთოდის მთავარი შეზღუდვა არის ის, რომ დიდი რაოდენობით არ შეიძლება გამოყენებულ იქნას ერთ შემთხვევაში.
რა მსგავსებაა თბილ და ცივ ტრიფსინიზაციას შორის?
- როგორც თბილი, ასევე ცივი ტრიფსინიზაციის პროცესი იყენებს ფერმენტ ტრიფსინს უჯრედების დაშლისთვის.
- როგორც თბილი, ასევე ცივი ტრიფსინიზაციის პროცესები გამოიყენება უჯრედების კულტურის პროცედურებში უჯრედების დაშლის მიზნით.
- როგორც თბილი და ცივი ტრიფსინიზაციის მკურნალობის პროცედურებში, უჯრედები წარმოიქმნება სუპერნატანტიდან.
რა განსხვავებაა თბილ და ცივ ტრიფსინიზაციას შორის?
თბილი vs ცივი ტრიფსინიზაცია |
|
| თბილი ტრიფსინიზაცია არის უჯრედების ტრიფსინის დამუშავების მეთოდი თბილ პირობებში 36,5 – 37 ტემპერატურაზე 0.. | ცივი ტრიფსინიზაცია არის ტრიფსინის დამუშავების პროცესი, რომელიც ხდება უფრო ცივ პირობებში, სასურველია ყინულში, ძალიან დაბალ ტემპერატურაზე. |
| პროტოკოლი | |
| დაჭრილი ქსოვილის ნაჭრები შენარჩუნებულია 37 0C მუდმივად მთელი პროცედურის განმავლობაში. | დაჭრილი ქსოვილის ნაჭრები თავდაპირველად ინახება ყინულივით ცივ ტემპერატურაზე და შემდეგ ინახება 37 0.. |
| ტემპერატურა | |
| თბილი ტრიფსინიზაცია ხდება 36,5 – 37 0 | ცივი ტრიფსინიზაცია ხდება ყინულის ცივ ტემპერატურაზე. |
| მოხმარებული დრო | |
| ნაკლები დროა საჭირო თბილი ტრიფსინიზაციის მთელი პროცესისთვის (დაახლოებით 4 საათი). | საჭიროა უფრო დიდი დრო (დაახლოებით 6-24 საათი) ცივი ტრიფსინიზაციისთვის. |
| სიცოცხლისუნარიანი უჯრედების გამოსავალი | |
| დაბალი თბილი ტრიფსინიზაცია. | მაღალი ცივი ტრიფსინიზაცია. |
| ცენტრიფუგაციის გამოყენება | |
| ცენტრიფუგაცია საჭიროა უჯრედების დაშლისთვის თბილ ტრიფსინიზაციაში. | ცენტრიფუგაცია არ არის საჭირო ცივი ტრიფსინიზაციისას. |
| ქსოვილის საწყისი რაოდენობა ტრიფსინიზაციისთვის | |
| ქსოვილის უფრო დიდი რაოდენობა შეიძლება გამოყენებულ იქნას თბილ ტრიფსინიზაციაში. | ქსოვილის უფრო მცირე რაოდენობა შეიძლება გამოყენებულ იქნას ცივი ტრიფსინიზაციისას. |
| უჯრედების დაზიანება | |
| მაღალი ცენტრიფუგაციის გამო თბილ ტრიფსინიზაციაში. | ნაკლები ცივი ტრიფსინიზაციის გამო. |
რეზიუმე – თბილი vs ცივი ტრიფსინიზაცია
ტრიფსინიზაცია არის ცილის დაშლის ფერმენტის ტრიფსინის გამოყენების მეთოდი უჯრედების კულტივირების პროცესში პირველადი უჯრედების კულტურების დაშლისა და მომზადებისთვის. არსებობს ტრიფსინიზაციის ორი ძირითადი ტექნიკა პროცედურის დროს გამოყენებული ტემპერატურის მიხედვით. ისინი თბილი და ცივი ტრიფსინიზაციაა. თბილი ტრიფსინიზაცია ტარდება 37 0C ტემპერატურაზე, ხოლო ცივი ტრიფსინიზაცია ტარდება ყინულის ცივ პირობებში.მიუხედავად იმისა, რომ ცივ ტრიფსინიზაციას უფრო მეტი დრო სჭირდება დასრულებას, ამბობენ, რომ მას აქვს სიცოცხლისუნარიანი უჯრედების უფრო მაღალი გამოსავალი. ეს გამოწვეულია იმით, რომ ცივ ტრიფსინიზაციაში უჯრედების დაზიანება მინიმუმამდეა დაყვანილი, რადგან ის არ იყენებს ენერგიულ ცენტრიფუგაციის საფეხურებს. ეს არის განსხვავება თბილ და ცივ ტრიფსინიზაციას შორის.
