BL21 და DH5 Alpha-ს შორის მთავარი განსხვავება ისაა, რომ BL21 არის პროტეაზას დეფიციტი გენეტიკურად ინჟინერიით კომპეტენტური E. coli უჯრედი, რომელიც გამოიყენება ძირითადად ცილის ექსპრესიისთვის, ხოლო DH5 Alpha არის გენეტიკურად ინჟინერიით კომპეტენტური E. coli უჯრედი recA1 მუტაციით, რომელიც ძირითადად გამოიყენება. პლაზმური ტრანსფორმაციისთვის.
E. coli არის ერთ-ერთი ცნობილი ორგანიზმი, რომელიც არჩეულია რეკომბინანტული ცილის წარმოებისთვის. წლების განმავლობაში იგი გახდა ყველაზე პოპულარული გამოხატვის პლატფორმა. იგი ასევე გამოიყენება როგორც უჯრედის ქარხანა. BL21 და DH5 Alpha არის ორი გენეტიკურად ინჟინერირებული E. coli უჯრედი, რომელიც ამჟამად გამოიყენება ცილის ექსპრესიისა და პლაზმიდის ტრანსფორმაციისთვის, შესაბამისად.
რა არის BL21?
BL21 არის პროტეაზას დეფიციტი გენეტიკურად ინჟინერიით კომპეტენტური E.coli უჯრედი, რომელიც ძირითადად გამოიყენება ცილის ექსპრესიისთვის. E. coli BL21 არის ბაქტერიული უჯრედი, რომელიც მიღებულია B შტამიდან. მას აქვს Lon პროტეაზას და ompT გარე მემბრანის პროტეაზას დეფექტები. იგი ჩვეულებრივ გამოიყენება რეკომბინანტული ცილის ექსპრესიისთვის, რადგან მას ჩვეულებრივ მოაქვს გამოხატული ცილების სტაბილურობა. BL21 სასარგებლოა ცილის გამოხატვისთვის pCold I-IV დნმ-ით და pCold TF დნმ-ით. მაგრამ ეს კომპეტენტური E. coli უჯრედი არ არის განკუთვნილი ცილის გამოხატვის სისტემისთვის T7 პრომოტორის გამოყენებით, როგორიცაა pET სისტემა. ამის მიზეზი ის არის, რომ BL21 არ გამოხატავს T7 RNA პოლიმერაზას. გარდა ამისა, არ არის რეკომენდირებული პლაზმიდის კონსტრუქციის ან მოსამზადებლად გამოყენება, რადგან მას არ აქვს recA მუტაცია.
სურათი 01: BL21
BL21 პირველად აღწერა Studier-მა 1986 წელს B ხაზის სხვადასხვა მოდიფიკაციის შემდეგ. BL21 უჯრედებს აქვთ LON პროტეაზას დეფიციტი, რომელიც ანადგურებს ბევრ უცხო ცილას. გარდა ამისა, მას აკლია კიდევ ერთი გენი, რომელიც კოდირებს გარე მემბრანის პროტეაზას (OmpT), რომლის ფუნქციაა უჯრედგარე ცილების დეგრადაცია. ამ ცილების ნაკლებობა იწვევს უცხო ცილის წარმატებულ წარმოებას E. coli BL21 უჯრედებში. გარდა ამისა, ამ უჯრედებში hsdSB მუტაცია ხელს უშლის უცხო დნმ-ის მეთილაციას და BL21 უჯრედების დარღვევას.
რა არის DH5 Alpha?
DH5 Alpha არის გენეტიკურად ინჟინერირებული კომპეტენტური E. coli უჯრედი recA1 მუტაციით, რომელიც ძირითადად გამოიყენება პლაზმიდების ტრანსფორმაციისთვის. DH5 Alpha E. coli უჯრედები გენეტიკური ინჟინერიით არის შექმნილი ამერიკელი ბიოლოგის დუგლას ჰანაჰანის მიერ ტრანსფორმაციის ეფექტურობის მაქსიმალურად გაზრდის მიზნით. DH5 ალფა უჯრედს აქვს სამი განსხვავებული მუტაცია: recA1, endA1 და lacZΔM15. recA1 არის ერთპუნქტიანი მუტაცია, რომელიც ცვლის გლიცინი 160-ს და ასპარტინის მჟავას ნარჩენს recA პოლიპეპტიდში.ეს მუტაცია გამორთავს რეკომბინაზების აქტივობას და ააქტიურებს ჰომოლოგიურ რეკომბინაციას. endA1 მუტაცია ააქტიურებს უჯრედშიდა ენდონუკლეაზას, რაც ხელს უშლის მას ჩასმული პლაზმიდის დაშლაში.
სურათი 02: DH5 ალფა
უფრო მეტიც, lacZΔM15 მუტაცია იძლევა ტრანსფორმირებული უჯრედების ლურჯ-თეთრ სკრინინგს. ეს უჯრედები კომპეტენტური უჯრედებია. ისინი ხშირად იყენებენ კალციუმის ქლორიდის ტრანსფორმაციას სასურველი პლაზმიდის ჩასართავად. ბოლო გამოკვლევებით დადგინდა, რომ DH5 ალფა უჯრედი ჰანაჰანის მეთოდით იყო ყველაზე ეფექტური კომპეტენტური უჯრედი პლაზმიდების ტრანსფორმაციისთვის.
რა მსგავსებაა BL21-სა და DH5 Alpha-ს შორის?
- BL21 და DH5 Alpha არის ორი გენეტიკურად შემუშავებული E.coli
- ორივე კომპეტენტური უჯრედია.
- ისინი შედგება განსხვავებული მუტაციებისგან.
- ორივეს არ აქვს ბუნებრივი ჰაბიტატი.
- ეს გამოიყენება ლაბორატორიული მიზნებისთვის, როგორიცაა ექსპრესიის კვლევები და კლონირების პროცედურები.
რა განსხვავებაა BL21-სა და DH5 Alpha-ს შორის?
BL21 არის პროტეაზას დეფიციტი გენეტიკურად ინჟინერიით კომპეტენტური E. coli უჯრედი, რომელიც ძირითადად გამოიყენება ცილის ექსპრესიისთვის. მეორეს მხრივ, DH5 Alpha არის გენეტიკურად ინჟინერირებული კომპეტენტური E. coli უჯრედი recA1 მუტაციით, რომელიც ძირითადად გამოიყენება პლაზმიდური ტრანსფორმაციისთვის. ასე რომ, ეს არის მთავარი განსხვავება BL21 და DH5 Alpha-ს შორის. გარდა ამისა, BL21 E. coli უჯრედს არ აქვს recA1 მუტაცია, ხოლო DH5 Alpha E. coli უჯრედს აქვს recA1 მუტაცია.
შემდეგი ინფოგრაფიკა ჩამოთვლის განსხვავებებს BL21 და DH5 Alpha-ს შორის ცხრილის სახით.
რეზიუმე – BL21 vs DH5 Alpha
E. coli-ს არაპათოგენური შტამები გენეტიკურად შემუშავებულია მეცნიერების მიერ ლაბორატორიული ექსპრესიის კვლევებისა და კლონირების მიზნით. BL21 და DH5 Alpha არის ორი გენეტიკურად ინჟინერირებული E. coli უჯრედი. BL21 ძირითადად გამოიყენება ცილის ექსპრესიის კვლევებისთვის. მეორეს მხრივ, DH5 Alpha ძირითადად გამოიყენება პლაზმიდური ტრანსფორმაციის მიზნებისთვის. ამრიგად, ეს არის განსხვავების შეჯამება BL21-სა და DH5 Alpha-ს შორის.
