საფუარი ერთი ჰიბრიდსა და საფუარის ორი ჰიბრიდს შორის მთავარი განსხვავებაა ის, რომ საფუარი ერთი ჰიბრიდი არის ინ ვიტროზე დაფუძნებული ანალიზი დნმ-პროტეინის ურთიერთქმედების გასაანალიზებლად, ხოლო საფუარი ორი ჰიბრიდი არის ინ ვიტროზე დაფუძნებული ანალიზი ცილა-ცილის ურთიერთქმედების გასაანალიზებლად.
უჯრედულ მოლეკულებს შორის ურთიერთქმედების შესწავლა დაგეხმარებათ განსაზღვროთ ამოცნობის ადგილები, რომლებიც ჩართულია გენის ექსპრესიასა და ცილების გზებში. დნმ-ისა და ცილების ურთიერთქმედება განუყოფელია უჯრედული პროცესებისთვის, როგორიცაა დნმ-ის მოდიფიკაციები და ტრანსკრიპციული რეგულაცია და ა.შ. მეორე მხრივ, ცილებისა და ცილების ურთიერთქმედება მნიშვნელოვან როლს ასრულებს უჯრედულ პროცესებში, როგორიცაა რეპლიკაცია, ტრანსკრიფცია, ტრანსლაცია და სიგნალის გადაცემა.ამიტომ, კრიტიკულად მნიშვნელოვანია უჯრედული მოლეკულების ამ ურთიერთქმედების იდენტიფიცირება სხვადასხვა ანალიზის საშუალებით. საფუარი ერთი ჰიბრიდი და საფუარი ორი ჰიბრიდი არის ორი ინ ვიტრო დაფუძნებული ანალიზი დნმ-ცილისა და ცილა-ცილის ურთიერთქმედების გასაანალიზებლად.
რა არის საფუარი ერთი ჰიბრიდი?
საფუარი ერთი ჰიბრიდი (Y1H) არის ინ ვიტრო დაფუძნებული ანალიზი უჯრედშიდა დნმ-პროტეინის ურთიერთქმედების გასაანალიზებლად. ეს მეთოდი პირველად ვანგმა და რიდმა დაადგინეს 1993 წელს. მას შემდეგ მან აჩვენა უფრო დიდი ძალა ბიოლოგიურ კვლევაში. ამ ანალიზში ორი ძირითადი კომპონენტია: დნმ-ის სატყუარა და ცილის მტაცებელი.
სურათი 01: საფუარი ერთი ჰიბრიდი
პროცედურისას, დნმ-ის თანმიმდევრობა (დნმ-ის სატყუარა) პირველად კლონირებულია ორი განსხვავებული რეპორტიორის ზემოთ (HIS3, LacZ).ეს მომხსენებელი კონსტრუქტები ინტეგრირებულია საფუარის შტამის გენომში. ტრანსკრიპციული ფაქტორები მიიღება როგორც ცილის მტაცებელი. ტრანსკრიპციული ფაქტორები შერწყმულია Gal4-ის საფუარის ტრანსკრიპციული აქტივაციის დომენთან (AD) ჰიბრიდული ცილების შესაქმნელად. მთელი ეს ჰიბრიდული ცილა ინტეგრირებულია პლაზმიდში საფუარის შტამში შესვლამდე. რეკომბინანტული პლაზმიდის შეყვანის შემდეგ, როდესაც ტრანსკრიპციული ფაქტორი ურთიერთქმედებს დნმ-ის ფრაგმენტთან, AD ნაწილი ააქტიურებს რეპორტიორი გენის ექსპრესიას (HIS3or LacZ). პლაზმიდების თანმიმდევრობა იძლევა ტრანსკრიპციული ფაქტორის იდენტიფიცირების საშუალებას, რომელსაც შეუძლია დაუკავშირდეს დნმ-ის ფრაგმენტს. ცოტა ხნის წინ, საფუარის ერთი ჰიბრიდული მეთოდი გამოიყენეს დაავადების დიაგნოზის შესასწავლად. ამიტომ, მომავალში, ეს ანალიზი უფრო ფართოდ იქნება გამოყენებული სამეცნიერო კვლევებსა და სამედიცინო მკურნალობაში.
რა არის საფუარი ორი ჰიბრიდი?
საფუარი ორი ჰიბრიდი (Y2H) არის ინ ვიტრო დაფუძნებული ანალიზი, რომელიც აანალიზებს უჯრედშიდა ცილებსა და ცილოვან ურთიერთქმედებებს.ეს მეთოდი თავდაპირველად აღმოაჩინეს სტენლი ფილდსმა და ოკ-კიუ სონგმა 1989 წელს. ეს ტექნიკა აღმოაჩენს ცილა-ცილის ურთიერთქმედებას საფუარის Gal4 ტრანსკრიფციის ფაქტორის გამოყენებით.
სურათი 02: საფუარი ორი ჰიბრიდი
ამ მეთოდით, ორი შერწყმა (ჰიბრიდი) პირველად აგებულია ინტერესის ცილების გამოყენებით: ერთი ცილის შერწყმა დნმ-ის დამაკავშირებელ დომენთან (DBD) და მეორე ცილის შერწყმა Gal4 ტრანსკრიფციის ფაქტორის აქტივატორ დომენთან (AD).. DBD-სთან შერწყმული ცილა ცნობილია როგორც სატყუარა, ხოლო AD-თან შერწყმული ცილა ცნობილია როგორც მტაცებელი. საფუარის შტამში, სატყუარასა და მტაცებლის ურთიერთქმედებისას, DBD და AD ახლოსაა, რათა წარმოიქმნას ფუნქციური Gal4 ტრანსკრიფციის ფაქტორი რეპორტიორი გენის ზემოთ.ფუნქციური ტრანსკრიფციის ფაქტორი ააქტიურებს რეპორტიორის გენის ექსპრესიას. გარდა ამისა, ეს მეთოდი ამჟამად გამოიყენება ძუძუმწოვრების უჯრედებში ინტეგრალური მემბრანის ცილების ურთიერთქმედების სკრინინგისთვის.
რა მსგავსებაა საფუარი ერთი ჰიბრიდსა და საფუარი ორი ჰიბრიდს შორის?
- საფუარი ერთი ჰიბრიდი და საფუარი ორი ჰიბრიდი არის ორი ინ ვიტრო დაფუძნებული ანალიზი დნმ-ცილისა და ცილა-ცილის ურთიერთქმედების გასაანალიზებლად.
- ეს ანალიზები იყენებენ საფუარის შტამებს.
- ორივე ანალიზი იყენებს Gal4 ტრანსკრიფციის ფაქტორის აქტივაციის დომენს (AD).
- ისინი იყენებენ მომხსენებელი გენის (HIS3, ან LacZ) გამოხატულებას ურთიერთქმედებების დასადგენად.
- მათ აქვთ სატყუარა და ნადირი.
- ორივე ანალიზი ძალზე სასარგებლოა თანამედროვე ბიოლოგიურ კვლევებში.
რა განსხვავებაა საფუარი ერთი ჰიბრიდსა და საფუარი ორი ჰიბრიდს შორის?
საფუარი ერთი ჰიბრიდი არის ინ ვიტროზე დაფუძნებული ანალიზი დნმ-ისა და პროტეინის ურთიერთქმედების გასაანალიზებლად, ხოლო საფუარი ორი ჰიბრიდი არის ინ ვიტროზე დაფუძნებული ანალიზი ცილისა და ცილოვანი ურთიერთქმედების გასაანალიზებლად.ამრიგად, ეს არის მთავარი განსხვავება საფუარს ერთ ჰიბრიდსა და საფუარს ორი ჰიბრიდს შორის. გარდა ამისა, საფუარის ერთ ჰიბრიდში სატყუარა არის დნმ-ის ფრაგმენტი, ხოლო მტაცებელი არის ცილის მოლეკულა. მეორეს მხრივ, საფუარის ორ ჰიბრიდში, ორივე სატყუარა და მტაცებელი ცილის მოლეკულებია.
ქვემოთ მოცემულ ინფოგრაფიკაში ჩამოთვლილია განსხვავებები საფუარს ერთი ჰიბრიდსა და საფუარი ორ ჰიბრიდს შორის ცხრილის სახით გვერდიგვერდ შედარებისთვის.
რეზიუმე – საფუარი ერთი ჰიბრიდი vs საფუარი ორი ჰიბრიდი
საფუარი ერთი ჰიბრიდი და საფუარი ორი ჰიბრიდი არის ორი მნიშვნელოვანი ინ ვიტრო დაფუძნებული ანალიზი. საფუარი ერთი ჰიბრიდი არის ინ ვიტროზე დაფუძნებული ანალიზი დნმ-ისა და ცილების ურთიერთქმედების გასაანალიზებლად, ხოლო საფუარი ორი ჰიბრიდი არის ინ ვიტროზე დაფუძნებული ანალიზი ცილისა და ცილოვანი ურთიერთქმედების გასაანალიზებლად. ამრიგად, ეს არის მთავარი განსხვავება საფუარს ერთ ჰიბრიდსა და საფუარს ორ ჰიბრიდს შორის.
