ძირითადი განსხვავება - ნიტროცელულოზა და PVDF
Western blotting არის მეთოდი, რომელიც იძლევა ცილის ნიმუშიდან სპეციფიკური ცილების გამოვლენისა და რაოდენობრივი განსაზღვრის საშუალებას. ტექნიკის საიმედოობა დამოკიდებულია გელისგან ცილების შთანთქმისთვის სწორი მემბრანის შერჩევაზე. არსებობს სხვადასხვა სახის მიკროფოროვანი გარსები. ნიტროცელულოზის და PVDF მემბრანა არის ორი ასეთი მემბრანა, რომელსაც მკვლევარები ანიჭებენ უპირატესობას სხვა ტიპის მემბრანებთან შედარებით მათი განსაკუთრებული ატრიბუტების გამო. ნიტროცელულოზას ან PVDF-ს შორის შერჩევა ასევე არის კიდევ ერთი გამოწვევა Western blotting-ში. ორივე ნიტროცელულოზას და PVDF-ს აქვს ცილის შთანთქმის მაღალი უნარი.ნიტროცელულოზასა და PVDF მემბრანას შორის მთავარი განსხვავებაა ის, რომ ნიტროცელულოზის მემბრანებს არ აქვთ ანტისხეულების მოშორების და მემბრანის ხელახალი გამოყენება ანტისხეულების აპრობირებისთვის, ხოლო PVDF მემბრანებს აქვთ გაშიშვლებისა და ხელახალი გამოყენების უნარი.
რა არის ნიტროცელულოზა?
ნიტროცელულოზა არის პოლიმერი, რომელიც წარმოიქმნება ცელულოზის აზოტის მჟავით დამუშავებით და გამოიყენება მოლეკულურ ბიოლოგიაში მიკროფოროვანი მემბრანების დასამზადებლად, განსაკუთრებით blotting ტექნიკისთვის, როგორიცაა სამხრეთი, ჩრდილოეთი და ვესტერნ blotting. ნიტროცელულოზის მემბრანების ფორების ზომები მერყეობს 3-დან 20 მკმ-მდე. ნიტროცელულოზის მიკროფოროვანი გარსები ხელს უწყობს მემბრანის ზედაპირზე მომხდარი იმუნოქიმიური რეაქციის გამოვლენას. ამიტომ, ნიტროცელულოზის მემბრანები ხშირად გამოიყენება ცილების იმობილიზაციისთვის და ვესტერნ ბლოტში სპეციფიური ცილების გამოსავლენად. ნიტროცელულოზის მემბრანებს ასევე შეუძლიათ გლიკოპროტეინების და ნუკლეინის მჟავების იმობილიზაცია.
ნიტროცელულოზის მემბრანები სასურველია გვერდითი ნაკადის ანალიზში რამდენიმე მახასიათებლის გამო.ნიტროცელულოზის მემბრანები შთანთქავს ცილებს მაღალი კონცენტრაციით. მემბრანის დასასველებლად გამოყენებული გამხსნელი არ ამცირებს ნიტროცელულოზის მემბრანის ცილის შეწოვას. ნიტროცელულოზის მემბრანები ადვილად იჭრება გელის სასურველ ზომამდე და ელექტრული ან კაპილარული გადაცემით გელიდან მემბრანაში გადადის ცილები. ნიტროცელულოზა უზრუნველყოფს ცილების უფრო სწრაფ ნაკადს მემბრანაში მაღალი შეკავშირების პოტენციალით. ნიტროცელულოზა აჩვენებს გაუმჯობესებულ მართვას. ნიტროცელულოზის მემბრანის კიდევ ერთი განსაკუთრებული ატრიბუტი არის ის, რომ მისი ადვილად წებება შესაძლებელია წყალგაუმტარი ადჰეზივებით სხვადასხვა პლასტმასის საყრდენებზე.
სურათი 01: ნიტროცელულოზის მემბრანა western blotting-ისთვის
რა არის PVDF?
პოლივინილიდენ დიფტორიდი (PVDF) არის ფტორპოლიმერი, რომელიც წარმოიქმნება ვინილიდენდიფტორიდის პოლიმერიზაციით და აქვს ცილების მაღალი იმობილიზაციის უნარი.ამიტომ, PVDF-ისგან დამზადებული მიკროფოროვანი მემბრანები გამოიყენება ვესტერნ ბლოტირების ტექნიკაში ცილების ნარევებიდან სპეციფიკური ცილების გასაანალიზებლად. PVDF მემბრანები ასევე შეიძლება გამოყენებულ იქნას ამინომჟავების ანალიზისა და ცილების თანმიმდევრობისთვის. PVDF მემბრანის ყველაზე მნიშვნელოვანი მახასიათებელი ნიტროცელულოზის მემბრანაზე არის ის, რომ მისი ადვილად ამოღება შესაძლებელია ანტისხეულებისგან და ხელახლა გამოყენებული ანტისხეულების შემდგომი ზონდებისთვის.
PVDF მემბრანები უფრო სქელია ვიდრე ნიტროცელულოზის მემბრანები; შესაბამისად, უფრო მდგრადია ზიანის მიმართ ხელახალი გამოყენებისას. PVDF მემბრანები ძალიან ჰიდროფობიურია. ამიტომ გამოყენებამდე ისინი უნდა იყოს გაჟღენთილი მეთანოლში ან იზოპროპანოლში.
რა განსხვავებაა ნიტროცელულოზასა და PVDF-ს შორის?
ნიტროცელულოზა vs PVDF |
|
| ნიტროცელულოზა არის პოლიმერი, რომელიც შედგება ცელულოზისგან. | PVDF არის ფტორპოლიმერი, რომელიც წარმოიქმნება ვინილიდენდიფტორიდის პოლიმერიზაციით. |
| მემბრანის ფორების ზომა | |
| პორების ტიპიური ზომებია 0.1, 0.2 ან 0.45μ | პორების ტიპიური ზომებია 0.1, 0.2 ან 0.45μm |
| ცილებთან შეკავშირების უნარი | |
| ნიტროცელულოზას აქვს ცილებთან შეკავშირების უნარი 80-დან 100 მკგ/სმ2. | PVDF აქვს ცილებთან შეკავშირების უნარი 170-დან 200 მკგ/სმ2. |
| მგრძნობელობა | |
| ეს აქვს დაბალი მგრძნობელობა PVDF-თან შედარებით. | ამას აქვს მაღალი მგრძნობელობა. |
| დაბალი გამოხატული ცილების გამოვლენა | |
| რადგან მგრძნობელობა დაბალია ნიტროცელულოზის მემბრანებში, ის არ არის შესაფერისი დაბალი გამოხატული ცილების გამოსავლენად. | ეს უფრო შესაფერისია დაბალი გამოხატული ცილების გამოსავლენად მისი მაღალი მგრძნობელობის გამო. |
| ფონური ხმაური | |
| აქვს უფრო დაბალი ფონის ხმაური | აქვს უფრო მაღალი ფონის ხმაური. |
| ურთიერთქმედება ცილებთან | |
| პროტეინის მოლეკულები უკავშირდებიან ნიტროცელულოზის მემბრანებს ჰიდროფობიური ურთიერთქმედების გზით. | პროტეინები აკავშირებს PVDF მემბრანებს ჰიდროფობიური და დიპოლური ურთიერთქმედების გზით. |
| მემბრანის ბუნება | |
| ნიტროცელულოზა არის მყიფე და მყიფე. თუმცა, ნიტროცელულოზის ვერსიები ხელმისაწვდომია და ისინი რეზისტენტულია. | PVDF უფრო გამძლეა და აქვს მაღალი ქიმიური წინააღმდეგობა. |
| შეძლეობის და ხელახალი გამოყენების შესაძლებლობა | |
| ნიტროცელულოზას შეიძლება გაუჭირდეს სიგნალის დაკარგვის გარეშე გაშიშვლება და გამოკვლევა. | PVDF იდეალურია აპლიკაციების გადამოწმებისა და თანმიმდევრობისთვის. |
| შესაბამისობა | |
| ნიტროცელულოზა იდეალურია დაბალი მოლეკულური წონის ცილების გამოსავლენად. | PVDF უფრო შესაფერისია უფრო მაღალი მოლეკულური წონის ცილების გამოსავლენად. |
| სხვა გამოყენება | |
| ნიტროცელულოზა შეიძლება გამოყენებულ იქნას ნუკლეინის მჟავას ანალიზისთვის და წერტილოვანი/სლოტი ბლოტისთვის. | PVDF შეიძლება გამოყენებულ იქნას ცილების თანმიმდევრობისა და მყარი ფაზის ანალიზის სისტემებისთვის. |
| ღირებულება | |
| ეს უფრო იაფია ვიდრე PVDF მემბრანები. | ეს უფრო ძვირია, ვიდრე ნიტროცელულოზის მემბრანა. |
| საჭიროება წინასწარ დასველება | |
| ნიტროცელულოზის მემბრანები არ საჭიროებს წინასწარ გაჟღენთვას მეთანოლთან | PVDF მემბრანები საჭიროებს წინასწარ გაჟღენთვას მეთანოლით. |
რეზიუმე - ნიტროცელულოზა vs PVDF
ნიტროცელულოზის მემბრანები იყო პირველი მემბრანა, რომელიც კომერციულად გამოიყენებოდა გვერდითი ნაკადის შესამოწმებლად. მათ აქვთ ცილების შთანთქმის მაღალი უნარი. ამიტომ, ნიტროცელულოზის მემბრანები გამოიყენება ვესტერნ ბლოტინგში. PVDF არის მემბრანის კიდევ ერთი ტიპი, რომელიც გამოიყენება ვესტერნ ბლოტინგში და მას ასევე აქვს ცილის შთანთქმის მაღალი უნარი. ორივე ტიპი გამოიყენება ვესტერნ ბლოტინგში ცილის ანალიზისთვის. ამასთან, PVDF მემბრანებს უფრო განსაკუთრებული ატრიბუტები აქვთ, რაც მათ უფრო შესაფერისს ხდის, ვიდრე ნიტროცელულოზის მემბრანები Western blotting-ისთვის. მაგრამ, ნიტროცელულოზის მემბრანები უფრო შესაფერისია დაბალი მოლეკულური წონის ცილების გამოსავლენად, PVDF მემბრანები უფრო შესაფერისია მაღალი მოლეკულური წონის ცილების გამოსავლენად.ეს არის განსხვავება ნიტროცელულოზასა და PVDF მემბრანებს შორის.
