ძირითადი განსხვავება - დნმ-ის და რნმ-ის ექსტრაქცია
დნმ-ისა და რნმ-ის შესწავლა სასიცოცხლო ასპექტებია მოლეკულური ბიოლოგიის, ბიოტექნოლოგიისა და გენეტიკის ძირითადი ცნებების გასაგებად. ამ კვლევების დროს ექსპერიმენტული პროცედურების ჩასატარებლად აუცილებელია სუფთა დნმ-ისა და რნმ-ის ნიმუშების ამოღება. მთავარი განსხვავება დნმ-სა და რნმ-ის ექსტრაქციას შორის არის ის, რომ დნმ-ის ექსტრაქციის პროცესი ასუფთავებს დნმ-ს, ხოლო რნმ-ის ექსტრაქცია ასუფთავებს რნმ-ს. დნმ-ის ექსტრაქციის პროცესს აქვს სამი განსხვავებული საფეხური: უჯრედების ლიზი და მემბრანის ლიპიდების და ცილების კატაბოლიზმი, კატაბოლიტების დაგროვება კონცენტრირებული მარილის ხსნარით და დნმ-ის დალექვა ეთანოლთან ერთად.სამი ნაბიჯის პროცედურა შეიძლება შედგებოდეს ორი სურვილისამებრ საფეხურისგან. რნმ-ის გაწმენდის პროცესი შედგება ოთხი განსხვავებული ეტაპისგან: გუანიდიუმის თიოციანატის დამატება უჯრედის ლიზისისთვის, ცილის დენატურაცია რიბონუკლეაზების ჩათვლით, რნმ-ის გამოყოფა ქლოროფორმისა და ფენოლის დამატებით და ნალექის გარეცხვა ეთანოლის გამოყენებით.
რა არის დნმ-ის ექსტრაქცია?
დნმ-ის ექსტრაქცია არის ფიზიკური და ქიმიური პროცესი, რომელიც გამოიყენება ნიმუშიდან დნმ-ის გასაწმენდად. დნმ-ის მოპოვება მნიშვნელოვანი ასპექტია მოლეკულური ბიოლოგიისა და სასამართლო მეცნიერებების კონტექსტში. პროცესი სამი ძირითადი ეტაპისგან შედგება. თავდაპირველად, საინტერესო უჯრედები უნდა იქნას მიღებული. შემდეგი, უჯრედების ლიზისი ხელს უწყობს უჯრედის მემბრანის გატეხვას, რომელიც ხსნის უჯრედს და ავლენს ციტოპლაზმას დნმ-თან ერთად. სურფაქტანტები ან სხვა სარეცხი საშუალებები შეიძლება გამოყენებულ იქნას უჯრედის მემბრანიდან ლიპიდების დასალიზებლად, ხოლო არსებული ცილები კატაბოლიზდება პროტეაზებით. ეს არჩევითი ნაბიჯია. მას შემდეგ, რაც უჯრედი ლიზდება, კატაბოლიზებული მოლეკულების დაგროვებას ხელს უწყობს მარილის კონცენტრირებული ხსნარები.მას მოჰყვება ხსნარის ცენტრიფუგირება, რომელიც გამოყოფს ნამსხვრევებს დნმ-ისგან. ამ ეტაპზე დიფერენცირებული დნმ ურევენ რეაგენტებსა და მარილებს, რომლებიც გამოიყენება უჯრედული ციკლის დროს.
სურათი 01: დნმ-ის ექსტრაქცია
მისი შემდგომი გაწმენდის მიზნით, შეიძლება გამოყენებულ იქნას შემდეგი ნაბიჯები. ერთ-ერთი მეთოდია ეთანოლის დალექვა, რომელიც გულისხმობს ყინულის ცივი ეთანოლის შერევას გამოყოფილი დნმ-ის ნიმუშთან. დნმ უხსნადია ალკოჰოლში და ამით წარმოქმნის გრანულებს დნმ-ის მოლეკულების ერთად აგრეგაციის გამო. ამ პროცესში ემატება ნატრიუმის აცეტატი, რათა გაიზარდოს ნალექების ხარისხი იონური სიძლიერის გაზრდით. ეთანოლის დალექვის პროცესის გარდა, ამისთვის შეიძლება გამოწვეული იყოს ფენოლ-ქლოროფორმის მოპოვების პროცესიც. ამ მეთოდით, ფენოლი ახდენს სინჯში არსებული ცილების დენატურაციას.ცენტრიფუგის შემდეგ, დენატურირებული ცილები დარჩება ორგანულ ფაზაში, ხოლო დნმ-ის მოლეკულები, რომლებიც შერეულია ქლოროფორმთან, იქნება წყალ ფაზაში. ქლოროფორმი ამოიღებს ფენოლის ნარჩენებს. ექსტრაქციის დასრულების შემდეგ, დნმ ინახება TE ბუფერში ან ულტრა სუფთა წყალში გახსნილი.
რა არის რნმ-ის ექსტრაქცია?
რნმ გაწმენდა არის პროცესი, რომლითაც რნმ იწმინდება ბიოლოგიური ნიმუშიდან. უჯრედებსა და ქსოვილებში რიბონუკლეაზას არსებობის გამო ეს პროცესი გართულებულია. რიბონუკლეაზას ფერმენტს აქვს რნმ-ის სწრაფი დეგრადაციის უნარი. რიბონუკლეაზების ქიმიური ბუნება უკიდურესად სტაბილურია და ძნელია მათი ინაქტივაცია. რიბონუკლეაზების ნეიტრალიზაცია არის ვარიანტი. ვინაიდან ეს ფერმენტი საყოველთაოა უჯრედებსა და ქსოვილებში, შემუშავებულია სპეციალური ტექნიკა რნმ-ის ექსტრაქციისთვის. მრავალი მეთოდიდან გავრცელებული მეთოდია გუანიდინის თიოცინატი-ფენოლ-ქლოროფორმის ექსტრაქცია.
სურათი 02: რნმ-ის ექსტრაქცია
გუანიდინის თიოცინატ-ფენოლ-ქლოროფორმის ექსტრაქციის მეთოდი დამოკიდებულია ცენტრიფუგაციაზე და ფაზურ განცალკევებაზე. ცენტრიფუგირებული ნარევი შედგება წყლის ნიმუშისა და წყლით გაჯერებული ხსნარისგან, რომელიც შედგება ფენოლისა და ქლოროფორმისგან. მას შემდეგ, რაც ცენტრიფუგია, ხსნარი შედგება ზედა წყალხსნარის და ქვედა ორგანული ფაზისგან ნეიტრალურ pH პირობებში (pH 7-8). რნმ იმყოფება წყლის ფაზაში. ორგანული ფაზა, როგორც წესი, შედგება ფენოლში გახსნილი ცილებისგან და ქლოროფორმში გახსნილი ლიპიდებისგან. ემატება ქაოტროპული აგენტი (მოლეკულა, რომელსაც აქვს წყლის მოლეკულებს შორის წყალბადის ბმების გაწყვეტის უნარი); ეს ცნობილია როგორც გუანიდინის თიოციანატი. ამ აგენტს აქვს ცილების დენატურაციის უნარი, რომელიც შეიცავს რიბონუკლეაზებს, რომლებსაც შეუძლიათ რნმ-ის დაშლა და ჩართული უჯრედების ლიზაში. ის ასევე გამოყოფს rRNA-ს რიბოსომური ცილებისგან.რნმ-ის გაწმენდის საბოლოო ეტაპი არის წყლის ფაზის ნალექის გარეცხვა ეთანოლით. რნმ ასევე შეიძლება გაიწმინდოს თხევადი აზოტის გამოყენებით.
რა მსგავსებაა დნმ-სა და რნმ-ის ექსტრაქციას შორის?
- ორივე მოპოვების პროცესი იყენებს მავნე ქიმიკატებს, როგორიცაა ფენოლი და ქლოროფორმი.
- ცენტრიფუგაცია აუცილებელი ტექნიკაა ორივე პროცესისთვის.
- ეთანოლი გამოიყენება ნალექის გასარეცხად და გაწმენდილი დნმ-ის ან რნმ-ის მისაღებად.
რა განსხვავებაა დნმ-სა და რნმ-ის ექსტრაქციას შორის?
დნმ vs რნმ ექსტრაქცია |
|
| დნმ-ის ექსტრაქცია არის პროცესი, რომელიც გამოაქვს დნმ-ს ორგანიზმიდან ან ნიმუშიდან. | რნმ-ის ექსტრაქცია არის პროცესი, რომელიც ამოიღებს რნმ-ს ნიმუშიდან. |
| ნაბიჯები | |
| დნმ-ის ექსტრაქციის პროცესი შედგება სამი განსხვავებული საფეხურისაგან ორი არჩევითი საფეხურით. | რნმ-ის ექსტრაქციის პროცესი შედგება ოთხი განსხვავებული ეტაპისგან. |
| რეაგენტები | |
| სურფაქტანტები, პროტეაზები (სურვილისამებრ), ალკოჰოლი, ქლოროფორმი, ფენოლი, ნატრიუმის აცეტატი გამოიყენება დნმ-ის ექსტრაქციისთვის. | გუანიდიუმის თიოციანატი, ქლოროფორმი, ფენოლი, ეთანოლი გამოიყენება რნმ-ის ექსტრაქციისთვის. |
შეჯამება - დნმ-ის წინააღმდეგ რნმ-ის ექსტრაქცია
დნმ და რნმ-ის ექსტრაქცია არის ექსპერიმენტული პროცედურების სასიცოცხლო ასპექტები მოლეკულური ბიოლოგიის, გენეტიკა და ბიოტექნოლოგიის შესასწავლად. ორივე პროცესი მოიცავს მსგავს რეაგენტებს, მაგრამ რნმ-ის ექსტრაქცია იყენებს სპეციალურ რეაგენტს, რომელიც ცნობილია როგორც გუანიდიუმის თიოციანატი, რომელიც ამცირებს რიბონუკლეაზების აქტივობას.ეს არის მთავარი განსხვავება დნმ-სა და რნმ-ის ექსტრაქციას შორის.
ჩამოტვირთეთ დნმ-ის PDF ვერსია რნმ-ის ექსტრაქციის წინააღმდეგ
შეგიძლიათ ჩამოტვირთოთ ამ სტატიის PDF ვერსია და გამოიყენოთ იგი ოფლაინ მიზნებისთვის ციტირების შენიშვნის მიხედვით. გთხოვთ გადმოწეროთ PDF ვერსია აქ განსხვავება დნმ-სა და რნმ-ის ექსტრაქციას შორის
