მთავარი განსხვავება ნიკის ტრანსლაციასა და ბოლო შევსებას შორის არის ის, რომ ნიკის ტრანსლაცია არის პროცესი, რომელიც ქმნის ეტიკეტირებულ დნმ-ის ზონდებს სხვადასხვა ჰიბრიდიზაციის რეაქციებისთვის, ხოლო ბოლო შევსება არის ტექნიკა, რომელიც ქმნის ბლაგვ ფრაგმენტებს ნუკლეოტიდების დამატებით ერთჯაჭვიან გადახურვებში.
ნიკის თარგმნა და ბოლო შევსება არის ორი ტექნიკა, რომელიც გამოიყენება მოლეკულურ ბიოლოგიაში. ნიკის ტრანსლაცია გამოიყენება ჰიბრიდიზაციის ზონდების მარკირებისთვის, სპეციფიკური ნუკლეოტიდური თანმიმდევრობების გამოსავლენად. ბოლო შევსება გამოიყენება ბლაგვი ფრაგმენტების დასამზადებლად, რომლებსაც ჰქონდათ წებოვანი ბოლოები ერთჯაჭვიანი გადახურვით. ორივე ტექნიკას დიდი მნიშვნელობა აქვს და ისინი რეგულარულად ხორციელდება მოლეკულურ კვლევით ლაბორატორიებში.
რა არის ნიკ თარგმანი?
ნიკის ტრანსლაცია არის მნიშვნელოვანი ტექნიკა, რომელიც გამოიყენება ეტიკეტირებული ზონდების მოსამზადებლად სხვადასხვა მოლეკულური ბიოლოგიური ტექნიკისთვის, როგორიცაა ბლოტი, in situ ჰიბრიდიზაცია, fluorescent in situ ჰიბრიდიზაცია და ა.შ. ეს არის დნმ-ის მარკირების in vitro მეთოდი. დნმ-ის ზონდები გამოიყენება დნმ-ის ან რნმ-ის კონკრეტული თანმიმდევრობების დასადგენად. მარკირებული ზონდის დახმარებით შესაძლებელია კონკრეტული ფრაგმენტების მონიშვნა ან ვიზუალიზაცია ნუკლეინის მჟავის რთული ნარევიდან. ამიტომ ეტიკეტირებული ზონდები მზადდება სხვადასხვა ტექნიკის გამოყენებით. ნიკის ტრანსლაცია ერთ-ერთი ასეთი მეთოდია, რომელიც აწარმოებს ეტიკეტირებულ ზონდებს DNase 1 და დნმ პოლიმერაზა 1 ფერმენტების დახმარებით.
სურათი 01: ნიკის თარგმანი
ნიკის თარგმნის პროცესი იწყება DNase 1 ფერმენტის აქტივობით. DNase 1 ბადებს ორჯაჭვიანი დნმ-ის ფოსფატის ხერხემალს ნუკლეოტიდებს შორის ფოსფოდიესტერული ბმების გაწყვეტით. ნიკის შექმნის შემდეგ, ნუკლეოტიდის თავისუფალი 3′ OH ჯგუფი წარმოიქმნება და მასზე იმოქმედებს დნმ პოლიმერაზა 1 ფერმენტი. დნმ პოლიმერაზა 1-ის 5'-დან 3'-მდე ეგზონუკლეაზური აქტივობა აშორებს ნუკლეოტიდებს ნიკიდან დნმ-ის ჯაჭვის 3' მიმართულებით.
ერთდროულად, დნმ პოლიმერაზა 1 ფერმენტის პოლიმერაზული აქტივობა მუშაობს და ამატებს ნუკლეოტიდებს ამოღებული ნუკლეოტიდების ჩანაცვლებისთვის. თუ ნუკლეოტიდები ეტიკეტირებულია, ჩანაცვლება მოხდება ეტიკეტირებული ნუკლეოტიდებით და ის მონიშნავს დნმ-ს იდენტიფიკაციისთვის. დაბოლოს, ეს ახლად სინთეზირებული ეტიკეტირებული დნმ შეიძლება გამოვიყენოთ ზონდებად სხვადასხვა ჰიბრიდიზაციის რეაქციებში.
რა არის ბოლო შევსება?
ბოლო შევსება არის ტექნიკა, რომელიც გამოიყენება მოლეკულურ ბიოლოგიაში ბუნდოვანი ფრაგმენტების დასამზადებლად. შეზღუდვის მონელება წარმოქმნის ფრაგმენტებს გადახურებით. ეს ფრაგმენტები შეიძლება არ იყოს თავსებადი პლაზმიდურ ვექტორებში ლიგატისთვის.ვექტორები ხშირად ბლაგვია, რათა შეუთავსებელი ბოლოები შეერთდეს. მაშასადამე, გადახურვის მქონე ფრაგმენტები შეიძლება გაბრუვდეს ნუკლეოტიდების დამატებით ძაფზე დამატებით, პოლიმერიზაციის შაბლონად გადახურვის გამოყენებით. ეს პროცესი ცნობილია როგორც საბოლოო შევსება.
დნმ პოლიმერაზები, როგორიცაა დნმ პოლიმერაზა I-ის კლენოუს ფრაგმენტი და T4 დნმ პოლიმერაზა, ახდენს ბოლო შევსების კატალიზებას. ისინი ამატებენ ნუკლეოტიდებს შესავსებად (5' → 3') და ღეჭავენ (3' → 5'). მას შემდეგ, რაც წებოვანი ბოლოები ივსება, ისინი ბლაგვი ხდება და მზად არიან შეერთონ ვექტორში.
გარდა ამისა, ბოლო შევსება შეიძლება გამოყენებულ იქნას დნმ-ის მოლეკულების მარკირებისთვის. თუმცა, მისი გამოყენება შესაძლებელია მხოლოდ წებოვანი ბოლოებით დნმ-ის მოლეკულების მარკირებისთვის. ნიკის ტრანსლაციასთან შედარებით, ბოლო შევსება უფრო ნაზი მეთოდია, რომელიც იშვიათად იწვევს დნმ-ის რღვევას.
რა მსგავსებაა ნიკის თარგმანსა და ბოლო შევსებას შორის?
- ნიკის თარგმნა და ბოლო შევსება მოლეკულური ბიოლოგიური ტექნიკაა.
- ისინი შეიძლება გამოყენებულ იქნას ზონდებისთვის.
- ორივე ინ ვიტროა
რა განსხვავებაა Nick Translation და ბოლოს შევსებას შორის?
Nick translation არის ტექნიკა, რომელიც ქმნის ეტიკეტირებულ ზონდებს ჰიბრიდიზაციისთვის. ამის საპირისპიროდ, ბოლო შევსება არის ტექნიკა, რომელიც ქმნის ბლაგვი ფრაგმენტებს ვექტორებში ლიგაციისთვის. ასე რომ, ეს არის მთავარი განსხვავება ნიკის თარგმანსა და ბოლო შევსებას შორის. გარდა ამისა, ნიკის ტრანსლაცია მოითხოვს 5'-დან 3'-მდე ეგზონუკლეაზას აქტივობის გამოყენებას, ხოლო ბოლო შევსება არ საჭიროებს 5'-დან 3'-მდე ეგზონუკლეაზას აქტივობას.
ქვემოთ მოცემული ინფოგრაფიკა უფრო დეტალურად ასახავს განსხვავებებს ნიკის თარგმანსა და ბოლო შევსებას შორის.
რეზიუმე – Nick Translation vs End Filling
ნიკის ტრანსლაცია არის მეთოდი, რომელიც აერთიანებს რადიო მარკირებულ ნუკლეოტიდებს დნმ-ში. ის ასინთეზებს ეტიკეტირებულ ზონდებს DNase 1 და E. coli დნმ პოლიმერაზა 1 ფერმენტების აქტივობაზე დაყრდნობით. ბოლო შევსება, მეორეს მხრივ, არის ტექნიკა, რომელიც აწარმოებს ბლაგვი ფრაგმენტებს. როდესაც ფრაგმენტებს აქვთ წებოვანი ბოლოები (ერთჯაჭვიანი გადახურვები), აუცილებელია მათი ბლაგვი ბოლოები გავხადოთ ვექტორებად გადაქცევის მიზნით. ბოლო შევსება ამატებს თავსებად ნუკლეოტიდებს და ქმნის ბლაგვი ბოლო ფრაგმენტებს, რათა ისინი თავსებადი გახადოს ლიგაციისთვის. ამრიგად, ეს აჯამებს განსხვავებას ნიკის თარგმნასა და ბოლო შევსებას შორის.
